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johnny4890

新虫 (小有名气)

[交流] rna终于提取出来了,可是反转录pcr(rt pcr)没有条带 已有7人参与

rna电泳图

(左边的是试剂盒提的,右边是TRIzol提的)
问题是做反转录pcr的时候做了两次都没有条带,只有对照组(基因级dna)有条带。
反转录的试剂盒是transgen的。
求助高手。
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txw87

木虫 (小有名气)


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-07 13:37:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by johnny4890 at 2012-05-06 21:36:44:
我有oligo dT(18)和GSP都做了反转录,都没有条带。杯具了。

嗯,我觉得你应该做一个参比基因的pcr。说实在的,你的提取试剂盒应该是qiagen的吧,我用的提取试剂盒和反转录试剂盒和你一样,看你的条带没道理做不出来的。另外2楼说的也很重要,你应该参考

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2012-05-06 21:58:08
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-06 19:17:37
你要看看你的引物是根据什么设计的,因为RNA和你的基因组的序列不是完全一样的,引物缺少了内含子序列,所以做反转录PCR的时候要根据你的RNA重新设计你的引物的。
2楼2012-05-06 16:47:07
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txw87

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是用哪种引物进行反转录的?看你的RNA电泳条带,RNA是有部分降解的。这种情况应该用Random Primer或GSP引物进行反转录。
3楼2012-05-06 17:02:01
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2012-05-06 21:31:31
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