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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增怎么就没有条带!已有17人参与

我想请问一下,我最近做PCR反应的时候怎么就没有目的基因片段产物???
是不是以下条件出问题了?

1)退火温度
2)引物浓度
3)模板浓度
4)dNTP浓度
5)Taq PlusI 聚合酶浓度
6)10X PCR buffer.

dNTP、Taq Plus聚合酶、10X PCR buffer 都是新的,剩下第一和第二的因素,
我想请问的是我一直P不出条带出来,是不是引物或者模板的问题??
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keeperw

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很有可能是引物的原因,最主要两条:3’端特异性要有保证;退火温度要一致
2楼2010-05-08 14:51:14
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todouhy

铜虫 (小有名气)


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再次检查一下自己的引物是否设计合理,各个组分的浓度!
3楼2010-05-08 14:56:54
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


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p不出来,一般就是引物问题,引物之前如果没有做过,那一般就是引物问题。但是模板也不容忽视,模板质量和浓度也要注意
4楼2010-05-08 15:03:01
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mxb2008

木虫 (著名写手)

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我在做反转录,也是什么条带也没有。我昨晚总结了一下。可能主要原因是自己加的量不对,应仔细检查加的量和反应条件,希望多多交流。871193014。
5楼2010-05-08 15:14:26
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miya173

银虫 (小有名气)

P不出来的原因太多了,这个需要深入讨论吧。同一条件下两次扩增有时候都可能不一样。PCR是门大学问啊
6楼2010-05-08 15:20:55
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nnsulei

金虫 (正式写手)

逐个找原因咯
努力做就有结果~
7楼2010-05-08 15:22:23
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)


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我也遇到过这样的问题
牛~逼~哄~哄
8楼2010-05-08 16:22:25
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caiyifan

金虫 (小有名气)


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你热盖的温度设定好了吗?要105度哦
I can and I will
9楼2010-05-08 16:41:28
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lingn

木虫 (正式写手)


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是不是模板中目的基因的量太少了?是拿cDNA P的还是基因组?
10楼2010-05-08 17:14:20
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