24小时热门版块排行榜    

查看: 3537  |  回复: 19

johnny4890

新虫 (小有名气)

[交流] rna终于提取出来了,可是反转录pcr(rt pcr)没有条带 已有7人参与

rna电泳图

(左边的是试剂盒提的,右边是TRIzol提的)
问题是做反转录pcr的时候做了两次都没有条带,只有对照组(基因级dna)有条带。
反转录的试剂盒是transgen的。
求助高手。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-06 19:17:37
你要看看你的引物是根据什么设计的,因为RNA和你的基因组的序列不是完全一样的,引物缺少了内含子序列,所以做反转录PCR的时候要根据你的RNA重新设计你的引物的。
2楼2012-05-06 16:47:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是用哪种引物进行反转录的?看你的RNA电泳条带,RNA是有部分降解的。这种情况应该用Random Primer或GSP引物进行反转录。
3楼2012-05-06 17:02:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wcwluwei

禁虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2012-05-06 21:31:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

johnny4890

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by txw87 at 2012-05-06 17:02:01:
你是用哪种引物进行反转录的?看你的RNA电泳条带,RNA是有部分降解的。这种情况应该用Random Primer或GSP引物进行反转录。

我有oligo dT(18)和GSP都做了反转录,都没有条带。杯具了。
5楼2012-05-06 21:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
基因组DNA引物和你RNA的引物可能是不一样的。。。注意哦楼主。。RNA是少内含子的
6楼2012-05-06 21:40:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+2, Good! 2012-05-08 18:58:39
西瓜: 回帖置顶 2012-05-08 18:58:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by johnny4890 at 2012-05-06 21:36:44:
我有oligo dT(18)和GSP都做了反转录,都没有条带。杯具了。

嗯,我觉得你应该做一个参比基因的pcr说实在的,你的提取试剂盒应该是qiagen的吧,我用的提取试剂盒和反转录试剂盒和你一样,看你的条带没道理做不出来的。另外2楼说的也很重要,你应该参考

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2012-05-06 21:57:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txw87

木虫 (小有名气)

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-07 13:37:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by johnny4890 at 2012-05-06 21:36:44:
我有oligo dT(18)和GSP都做了反转录,都没有条带。杯具了。

嗯,我觉得你应该做一个参比基因的pcr。说实在的,你的提取试剂盒应该是qiagen的吧,我用的提取试剂盒和反转录试剂盒和你一样,看你的条带没道理做不出来的。另外2楼说的也很重要,你应该参考

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2012-05-06 21:58:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

johnny4890

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-05-06 21:40:10:
基因组DNA引物和你RNA的引物可能是不一样的。。。注意哦楼主。。RNA是少内含子的

根据ncbi,内含子在中间,只有一个,所以引物是一样的吧。
9楼2012-05-07 17:17:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

johnny4890

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by txw87 at 2012-05-06 21:58:08:
嗯,我觉得你应该做一个参比基因的pcr。说实在的,你的提取试剂盒应该是qiagen的吧,我用的提取试剂盒和反转录试剂盒和你一样,看你的条带没道理做不出来的。另外2楼说的也很重要,你应该参考

是的,qiagen的RNeasy mini kit,什么参比基因啊?
10楼2012-05-07 17:29:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 johnny4890 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:34 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:18 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-28 23:19 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:45 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子,一条来自文献,一条来自AI——不告诉你答案,你会选哪条? +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[找工作] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-28 22:32 by ez6fGg9abYaj
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:28 by ez6fGg9abYaj
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-28 22:21 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 17:30 by ZYXdhzDAy9ZX
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意! +7 zju2000 2026-09-26 8/400 2026-09-28 16:42 by beefly
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 15:32 by ZYXdhzDAy9ZX
信息提示
请填处理意见