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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取结果，我提了好多次，传说中的高质量没出现
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fengyunqb

新虫 (小有名气)

[求助] RNA提取结果，我提了好多次，传说中的高质量没出现

RNA提取结果，我提了好多次，快吐了，传说中的高质量没出现，大家帮我看看，那一次的结果能用来做5 RACE PCR

前面是5-212引物出的5端片段，后面是所有RNA电泳图，前面两个是上学期的，后面是最近一直失败提的.jpg
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1楼 2013-03-27 09:21:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晓学究

木虫 (著名写手)
你这个就是DNA污染加RNA降解，管子必须用进口的或泡过DEPC的国产的。操作一定在冰上进行，总之一点，要想尽办法减少RNase污染，另外，你跑的电泳时间是不是太久了。
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锻炼，饮食，计划，幸福
9楼2013-03-27 22:25:43
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晓学究

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:15:44
你这个就是DNA污染加RNA降解，管子必须用进口的或泡过DEPC的国产的。操作一定在冰上进行，总之一点，要想尽办法减少RNase污染，另外，你跑的电泳时间是不是太久了。
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锻炼，饮食，计划，幸福
10楼2013-03-27 22:26:05
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普通回帖

bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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fengyunqb: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-27 11:34:44
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-27 13:39:43
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:15:48
你从什么组织中提取RNA啊，如果是植物就要最幼嫩的，按说一般用Trizol提都没多大问题。一般我提了后就分装到负80度保存了
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2楼2013-03-27 10:12:22
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bloodwar at 2013-03-27 10:12:22
你从什么组织中提取RNA啊，如果是植物就要最幼嫩的，按说一般用Trizol提都没多大问题。一般我提了后就分装到负80度保存了

鱼脑，那你看我哪一次的能够用来作5'race
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3楼2013-03-27 11:34:37
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:01
重提吧
貌似六个中有3个是有DNA污染的，其他的降解了
用具一定要无RNA酶，如果是手动研磨的话尽量缩短研磨时间，不过你的是鱼脑的话应该不用研太久
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我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨
4楼2013-03-27 11:58:22
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jinqimaggie

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:09
可以加RNAse INHIBITOR
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5楼2013-03-27 13:09:00
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shangming

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
哪一个也不行，用DEPC水重新提吧
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6楼2013-03-27 13:51:35
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:27
dna污染比较严重，请问lz是用的什么提的，我建议换用invitrogen的TRIZol（注意买正品的），用这个的话，其实基本不需要加DNase的。
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7楼2013-03-27 15:50:06
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:32
fengyunqb: 金币+1 2013-04-20 15:16:49
胰脏、脾脏、大脑等部位RNA酶较多，想得到好的RNA提取结果较难，我一般是取样后马上放入Trizol中，然后尽量加快抽提实验的速度，所有的耗材和试剂做到无RNase，实验结束后分装，留一管做检测，其他马上入-80冰箱。电泳检测的时候电压加大，快速跑完，否则电泳过程也会折腾RNA。
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8楼2013-03-27 16:44:47
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