24小时热门版块排行榜    

查看: 1974  |  回复: 19

goodboy

金虫 (小有名气)

首先DNA污染确实很严重,其次电泳时间过长,建议你做1%琼脂糖胶(新配置的)在新的电泳缓冲液中跑10min就可以看清楚条带
11楼2013-03-28 00:17:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vazyme小谷

新虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

12楼2013-03-29 13:29:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xudabin98

木虫 (正式写手)

13楼2013-03-29 16:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提取的RNA都有降解,做RACE对RNA的质量要求比较高,你提取的没有一个可以用来做RACE的,重提吧!加油!
14楼2013-03-29 17:29:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 晓学究 at 2013-03-27 22:26:05
你这个就是DNA污染加RNA降解,管子必须用进口的或泡过DEPC的国产的。操作一定在冰上进行,总之一点,要想尽办法减少RNase污染,另外,你跑的电泳时间是不是太久了。

谢谢指点,DEPC浸泡是必须的,我一般是液氮研磨,粉末状很给力,长期提RNA,全段时间中邪了就是污染,后来我用DNA酶处理下OK了,现在好的5RACE结果已经出来了。
15楼2013-04-20 15:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2013-03-27 11:58:22
重提吧
貌似六个中有3个是有DNA污染的,其他的降解了
用具一定要无RNA酶,如果是手动研磨的话尽量缩短研磨时间,不过你的是鱼脑的话应该不用研太久

谢谢指点,DEPC浸泡是必须的,我一般是液氮研磨,粉末状很给力,长期提RNA,前段时间中邪了就是污染,后来我用DNA酶处理下OK了,现在好的5RACE结果已经出来了。
16楼2013-04-20 15:14:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jinqimaggie at 2013-03-27 13:09:00
可以加RNAse INHIBITOR

谢谢指点,DEPC浸泡是必须的,我一般是液氮研磨,粉末状很给力,长期提RNA,前段时间中邪了就是污染,后来我用DNA酶处理下OK了,现在好的5RACE结果已经出来了。
17楼2013-04-20 15:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by shangming at 2013-03-27 13:51:35
哪一个也不行,用DEPC水重新提吧

谢谢指点,DEPC浸泡是必须的,我一般是液氮研磨,粉末状很给力,长期提RNA,前段时间中邪了就是污染,后来我用DNA酶处理下OK了,现在好的5RACE结果已经出来了。
18楼2013-04-20 15:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-27 15:50:06
dna污染比较严重,请问lz是用的什么提的,我建议换用invitrogen的TRIZol(注意买正品的),用这个的话,其实基本不需要加DNase的。

谢谢指点,DEPC浸泡是必须的,我一般是液氮研磨,粉末状很给力,长期提RNA,前段时间中邪了就是污染,后来我用DNA酶处理下OK了,现在好的5RACE结果已经出来了。
19楼2013-04-20 15:15:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengyunqb

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by amilie030312 at 2013-03-27 16:44:47
胰脏、脾脏、大脑等部位RNA酶较多,想得到好的RNA提取结果较难,我一般是取样后马上放入Trizol中,然后尽量加快抽提实验的速度,所有的耗材和试剂做到无RNase,实验结束后分装,留一管做检测,其他马上入-80冰箱。电 ...

谢谢指点,DEPC浸泡是必须的,我一般是液氮研磨,粉末状很给力,长期提RNA,前段时间中邪了就是污染,后来我用DNA酶处理下OK了,现在好的5RACE结果已经出来了。
20楼2013-04-20 15:15:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fengyunqb 的主题更新
信息提示
请填处理意见