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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取结果，我提了好多次，传说中的高质量没出现
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goodboy

金虫 (小有名气)
首先DNA污染确实很严重，其次电泳时间过长，建议你做1%琼脂糖胶（新配置的）在新的电泳缓冲液中跑10min就可以看清楚条带
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11楼2013-03-28 00:17:37
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vazyme小谷

新虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
12楼2013-03-29 13:29:20
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xudabin98

木虫 (正式写手)
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5191776 希望对你能够有帮助
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13楼2013-03-29 16:25:20
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提取的RNA都有降解，做RACE对RNA的质量要求比较高，你提取的没有一个可以用来做RACE的，重提吧！加油！
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14楼2013-03-29 17:29:14
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 晓学究 at 2013-03-27 22:26:05
你这个就是DNA污染加RNA降解，管子必须用进口的或泡过DEPC的国产的。操作一定在冰上进行，总之一点，要想尽办法减少RNase污染，另外，你跑的电泳时间是不是太久了。

谢谢指点，DEPC浸泡是必须的，我一般是液氮研磨，粉末状很给力，长期提RNA，全段时间中邪了就是污染，后来我用DNA酶处理下OK了，现在好的5RACE结果已经出来了。
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15楼2013-04-20 15:14:01
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2013-03-27 11:58:22
重提吧
貌似六个中有3个是有DNA污染的，其他的降解了
用具一定要无RNA酶，如果是手动研磨的话尽量缩短研磨时间，不过你的是鱼脑的话应该不用研太久

谢谢指点，DEPC浸泡是必须的，我一般是液氮研磨，粉末状很给力，长期提RNA，前段时间中邪了就是污染，后来我用DNA酶处理下OK了，现在好的5RACE结果已经出来了。
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16楼2013-04-20 15:14:42
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jinqimaggie at 2013-03-27 13:09:00
可以加RNAse INHIBITOR

谢谢指点，DEPC浸泡是必须的，我一般是液氮研磨，粉末状很给力，长期提RNA，前段时间中邪了就是污染，后来我用DNA酶处理下OK了，现在好的5RACE结果已经出来了。
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17楼2013-04-20 15:14:49
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shangming at 2013-03-27 13:51:35
哪一个也不行，用DEPC水重新提吧

谢谢指点，DEPC浸泡是必须的，我一般是液氮研磨，粉末状很给力，长期提RNA，前段时间中邪了就是污染，后来我用DNA酶处理下OK了，现在好的5RACE结果已经出来了。
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18楼2013-04-20 15:14:57
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-03-27 15:50:06
dna污染比较严重，请问lz是用的什么提的，我建议换用invitrogen的TRIZol（注意买正品的），用这个的话，其实基本不需要加DNase的。

谢谢指点，DEPC浸泡是必须的，我一般是液氮研磨，粉末状很给力，长期提RNA，前段时间中邪了就是污染，后来我用DNA酶处理下OK了，现在好的5RACE结果已经出来了。
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19楼2013-04-20 15:15:17
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fengyunqb

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by amilie030312 at 2013-03-27 16:44:47
胰脏、脾脏、大脑等部位RNA酶较多，想得到好的RNA提取结果较难，我一般是取样后马上放入Trizol中，然后尽量加快抽提实验的速度，所有的耗材和试剂做到无RNase，实验结束后分装，留一管做检测，其他马上入-80冰箱。电 ...

谢谢指点，DEPC浸泡是必须的，我一般是液氮研磨，粉末状很给力，长期提RNA，前段时间中邪了就是污染，后来我用DNA酶处理下OK了，现在好的5RACE结果已经出来了。
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20楼2013-04-20 15:15:26
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