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llxxdl620

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Hela细胞中RNA的提取

从Hela细胞中提取RNA,利用RNA试剂盒提取，不知道每个细胞中有多少特定序列的mRNA，每个细胞中RNA的数量大约是多少呢，最终提取完后，如何知道自己提取成功了呢？能否通过跑电泳来表示呢？如果可以，那么会是多少个碱基呢？2000左右对吗？
我是个外行，望大家帮帮忙！谢谢
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1楼 2010-09-25 20:39:57
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qiangfeng

金虫 (小有名气)
llxxdl620(金币+10): 2010-09-26 09:03:46
好像就是不能知道每个细胞中有多少特定序列的mRNA，每个细胞中RNA的数量大约是多少吧？
谁知道的话，愿闻其详。。

我不知道你用的是什么试剂盒。我用Trizol Reagent提取过total RNA，用甲醛变性的琼脂糖跑电泳，结果是三条明显的亮条带28S（5kb）,18S(2kb),5.8S(0.1-0.3kb),效果还不错。
建议你从网上下载TRIZOL Reagent 使用说明书，以作参考。

以上仅是个人意见。。
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顺势而行，问心无愧！
2楼2010-09-25 21:05:13
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llxxdl620

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qiangfeng at 2010-09-25 21:05:13:
好像就是不能知道每个细胞中有多少特定序列的mRNA，每个细胞中RNA的数量大约是多少吧？
谁知道的话，愿闻其详。。

我不知道你用的是什么试剂盒。我用Trizol Reagent提取过total RNA，用甲醛变性的琼脂糖跑电泳 ...

我是从天根那里订的试剂盒，我跑出来的电泳只有两条带，一个是2000kb,一个是300kb左右吧，没有5000kb的，这是不是说明我没有提出来RNA，还是说我的电泳跑的不好啊？谢谢你！
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3楼2010-09-26 09:06:22
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jasco

木虫 (正式写手)
llxxdl620(金币+10): 2010-09-27 08:58:22
细胞样品rna提取相对简单，trizol就能提的很好了，电泳检测完整性，然后测OD260 和280确定纯度，
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4楼2010-09-26 09:07:52
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by llxxdl620 at 2010-09-26 09:06:22:



我是从天根那里订的试剂盒，我跑出来的电泳只有两条带，一个是2000kb,一个是300kb左右吧，没有5000kb的，这是不是说明我没有提出来RNA，还是说我的电泳跑的不好啊？谢谢你！

可能是28s降解了，
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5楼2010-09-26 09:10:00
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llxxdl620

金虫 (小有名气)
[quote]Originally posted by jasco at 2010-09-26 09:07:52:
细胞样品rna提取相对简单，trizol就能提的很好了，电泳检测完整性，然后测确定纯度， [/q

不好意思，我是个外行，能问一下OD260 和280是什么？有特殊的仪器吗？
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6楼2010-09-27 08:59:19
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jasco

木虫 (正式写手)
llxxdl620(金币+10): 2010-09-28 11:05:23
引用回帖:
Originally posted by llxxdl620 at 2010-09-27 08:59:19:
[quote]Originally posted by jasco at 2010-09-26 09:07:52:
细胞样品rna提取相对简单，trizol就能提的很好了，电泳检测完整性，然后测确定纯度， [/q

不好意思，我是个外行，能问一下OD260 和280是什 ...

紫外分光光度计，
测定260nm和280nm时吸光度，OD260/OD280（Ratio，R）=1.8--2.0时，认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的
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7楼2010-09-27 09:15:59
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