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llxxdl620

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Hela细胞中RNA的提取

从Hela细胞中提取RNA,利用RNA试剂盒提取,不知道每个细胞中有多少特定序列的mRNA,每个细胞中RNA的数量大约是多少呢,最终提取完后,如何知道自己提取成功了呢?能否通过跑电泳来表示呢?如果可以,那么会是多少个碱基呢?2000左右对吗?
我是个外行,望大家帮帮忙!谢谢
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qiangfeng

金虫 (小有名气)

llxxdl620(金币+10): 2010-09-26 09:03:46
好像就是不能知道每个细胞中有多少特定序列的mRNA,每个细胞中RNA的数量大约是多少吧?
谁知道的话,愿闻其详。。

我不知道你用的是什么试剂盒。我用Trizol Reagent提取过total RNA,用甲醛变性的琼脂糖跑电泳,结果是三条明显的亮条带28S(5kb),18S(2kb),5.8S(0.1-0.3kb),效果还不错。
建议你从网上下载TRIZOL Reagent 使用说明书,以作参考。

以上仅是个人意见。。
顺势而行,问心无愧!
2楼2010-09-25 21:05:13
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llxxdl620

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by qiangfeng at 2010-09-25 21:05:13:
好像就是不能知道每个细胞中有多少特定序列的mRNA,每个细胞中RNA的数量大约是多少吧?
谁知道的话,愿闻其详。。

我不知道你用的是什么试剂盒。我用Trizol Reagent提取过total RNA,用甲醛变性的琼脂糖跑电泳 ...

我是从天根那里订的试剂盒,我跑出来的电泳只有两条带,一个是2000kb,一个是300kb左右吧,没有5000kb的,这是不是说明我没有提出来RNA,还是说我的电泳跑的不好啊?谢谢你!
3楼2010-09-26 09:06:22
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jasco

木虫 (正式写手)

llxxdl620(金币+10): 2010-09-27 08:58:22
细胞样品rna提取相对简单,trizol就能提的很好了,电泳检测完整性,然后测OD260 和280确定纯度,
4楼2010-09-26 09:07:52
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jasco

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by llxxdl620 at 2010-09-26 09:06:22:



我是从天根那里订的试剂盒,我跑出来的电泳只有两条带,一个是2000kb,一个是300kb左右吧,没有5000kb的,这是不是说明我没有提出来RNA,还是说我的电泳跑的不好啊?谢谢你!

可能是28s降解了,
5楼2010-09-26 09:10:00
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llxxdl620

金虫 (小有名气)

[quote]Originally posted by jasco at 2010-09-26 09:07:52:
细胞样品rna提取相对简单,trizol就能提的很好了,电泳检测完整性,然后测确定纯度, [/q

不好意思,我是个外行,能问一下OD260 和280是什么?有特殊的仪器吗?
6楼2010-09-27 08:59:19
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jasco

木虫 (正式写手)

llxxdl620(金币+10): 2010-09-28 11:05:23
引用回帖:
Originally posted by llxxdl620 at 2010-09-27 08:59:19:
[quote]Originally posted by jasco at 2010-09-26 09:07:52:
细胞样品rna提取相对简单,trizol就能提的很好了,电泳检测完整性,然后测确定纯度, [/q

不好意思,我是个外行,能问一下OD260 和280是什 ...

紫外分光光度计,
测定260nm和280nm时吸光度,OD260/OD280(Ratio,R)=1.8--2.0时,认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的
7楼2010-09-27 09:15:59
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