应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
211/3返回列表123下一页
查看: 2112  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

上官慧

铁虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带

反转录很多次，用的是takara的反转录试剂盒。用β-actin都没p出来。β-actinpcr后条带很多，在目的条带处阴性对照跟基因组dna都pcr出来了。很是郁闷，请各位虫友帮忙解决~~

这是我提的rna

这是我β-actin的结果，第一个是阴性没加反转录酶的rna。β-actin产物在c



[ Last edited by 上官慧 on 2012-5-17 at 09:26 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-17 09:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:41:11
actin出那么多带可能是你的引物特异性不好，或者是不是你的模版被污染了啊？还有你的说明不是很明白，按理说阴性的话应该是没有带的，你的却出带了，很有可能是你的模版被污染了！
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-17 10:02:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 10:02:18:
actin出那么多带可能是你的引物特异性不好，或者是不是你的模版被污染了啊？还有你的说明不是很明白，按理说阴性的话应该是没有带的，你的却出带了，很有可能是你的模版被污染了！

是几次反转录的cDNA用作模板都是这个结果，目标条带是211bp，用的marker是DL500.模板是翻转后就用了，按说也没什么机会污染的。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-17 10:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 10:12:02:
是几次反转录的cDNA用作模板都是这个结果，目标条带是211bp，用的marker是DL500.模板是翻转后就用了，按说也没什么机会污染的。

Marker最亮的带是多大啊？
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-17 10:29:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 10:29:16:
Marker最亮的带是多大啊？

是200
回复此楼
5楼2012-05-17 10:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 10:39:36:
是200

其实我还是部太能看明白你的描述，你所有的孔都是用actin的引物P的吗？还是也用了你的目的基因的引物啊？
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-17 10:44:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 10:44:19:
其实我还是部太能看明白你的描述，你所有的孔都是用actin的引物P的吗？还是也用了你的目的基因的引物啊？

只用的是actin的引物p的
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-17 11:08:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)
反转录结束后定量了没有？
稀释了多少倍做的模板？
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-17 12:02:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-17 12:02:03:
反转录结束后定量了没有？
稀释了多少倍做的模板？

反转录之后没有定量，应该怎么定量呢？50ul的体系，加1ul的模板。模板浓度0.1ug/ul
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-17 12:07:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:41:23
我大概明白了你的意思了，你的第一条亮带就是在marker200的那个应该就是你的目的带啊，其它的应该是非特异性扩增，最下面糊的那条是引物二聚体，你这不叫没P出来，你这明明就是P出来了啊，只是引物特意性不好，至于你说的阴性对照，我觉得一般没有像你这样设的吧，一般是不加模版P一下吧！希望对您有帮助。
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-17 13:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 上官慧 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 336材料与化工085600求调剂 +7 水星记infp 2026-04-05 7/350 2026-04-06 00:57 by fmesaito
[考研] 一志愿郑州大学085600求调剂 +17 吃的不少 2026-04-05 20/1000 2026-04-06 00:32 by T可可西里T
[考研] 306分材料与化工求调剂 +7 黎吧啦啦你很有� 2026-04-03 7/350 2026-04-05 17:18 by Hdyxbekcb
[考研] 323求调剂（计算机视觉和大模型项目经历） +3 chaoxiicy 2026-03-31 3/150 2026-04-05 10:33 by zhq0425
[考研] 301求调剂 +12 121. 2026-04-04 12/600 2026-04-05 09:00 by 来看流星雨10
[考研] 求调剂 +6 朔朔话 2026-04-02 7/350 2026-04-04 19:16 by 蓝云思雨
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
[考研] 333求调剂 +9 阿科逸 2026-03-31 9/450 2026-04-04 18:25 by macy2011
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-03-31 7/350 2026-04-02 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿大工学硕，求调剂 +4 yub0811 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:36 by 百灵童888
[考研] 260求调剂 +6 朱芷琳 2026-04-02 6/300 2026-04-02 20:27 by 6781022
[考研] 农学考研求调剂 +3 dkdkxm 2026-04-01 3/150 2026-04-02 16:04 by wangjagri
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 土木304求调剂 +6 兔突突突， 2026-03-31 7/350 2026-04-02 09:06 by coolminer
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 22:25 by zhouyuwinner
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 339求调剂 +5 zjjkt 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:18 by JourneyLucky
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭