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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带
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上官慧

铁虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带

反转录很多次，用的是takara的反转录试剂盒。用β-actin都没p出来。β-actinpcr后条带很多，在目的条带处阴性对照跟基因组dna都pcr出来了。很是郁闷，请各位虫友帮忙解决~~

这是我提的rna

这是我β-actin的结果，第一个是阴性没加反转录酶的rna。β-actin产物在c



[ Last edited by 上官慧 on 2012-5-17 at 09:26 ]
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1楼 2012-05-17 09:18:52
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:41:23
我大概明白了你的意思了，你的第一条亮带就是在marker200的那个应该就是你的目的带啊，其它的应该是非特异性扩增，最下面糊的那条是引物二聚体，你这不叫没P出来，你这明明就是P出来了啊，只是引物特意性不好，至于你说的阴性对照，我觉得一般没有像你这样设的吧，一般是不加模版P一下吧！希望对您有帮助。
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10楼2012-05-17 13:28:35
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friya0910

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:41:11
actin出那么多带可能是你的引物特异性不好，或者是不是你的模版被污染了啊？还有你的说明不是很明白，按理说阴性的话应该是没有带的，你的却出带了，很有可能是你的模版被污染了！
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2楼2012-05-17 10:02:18
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上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 10:02:18:
actin出那么多带可能是你的引物特异性不好，或者是不是你的模版被污染了啊？还有你的说明不是很明白，按理说阴性的话应该是没有带的，你的却出带了，很有可能是你的模版被污染了！

是几次反转录的cDNA用作模板都是这个结果，目标条带是211bp，用的marker是DL500.模板是翻转后就用了，按说也没什么机会污染的。
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3楼2012-05-17 10:12:02
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 10:12:02:
是几次反转录的cDNA用作模板都是这个结果，目标条带是211bp，用的marker是DL500.模板是翻转后就用了，按说也没什么机会污染的。

Marker最亮的带是多大啊？
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4楼2012-05-17 10:29:16
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