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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA后，反转录后用β-actinpcr很多条带
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上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 13:28:35:
我大概明白了你的意思了，你的第一条亮带就是在marker200的那个应该就是你的目的带啊，其它的应该是非特异性扩增，最下面糊的那条是引物二聚体，你这不叫没P出来，你这明明就是P出来了啊，只是引物特意性不好，至 ...

阴性对照是想验证一下提的rna有没有基因组dna，加了rna也不会p出来才对呀~
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11楼2012-05-17 16:27:28
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 16:27:28:
阴性对照是想验证一下提的rna有没有基因组dna，加了rna也不会p出来才对呀~

按理说应该P不出来的，如果要看有没有DNA污染的话最好在内含子区设计一段引物去P，如果能P出来就说明有DNA污染了！
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12楼2012-05-17 16:33:25
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上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 16:33:25:
按理说应该P不出来的，如果要看有没有DNA污染的话最好在内含子区设计一段引物去P，如果能P出来就说明有DNA污染了！

谢谢啦~
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13楼2012-05-17 16:51:11
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 12:07:23:
反转录之后没有定量，应该怎么定量呢？50ul的体系，加1ul的模板。模板浓度0.1ug/ul

没定量怎么算出来的 模板浓度？
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14楼2012-05-17 17:28:30
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上官慧

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-17 17:28:30:
没定量怎么算出来的 模板浓度？

反转录试剂盒上写的，total rna用2ug最后体积是20ul，得出模板浓度时0.1ug/ul
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15楼2012-05-17 18:20:40
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 鼓励应助 2012-05-18 15:35:23
无论你的体系有没有污染，你的引物质量是不合格的。重新设计引物吧，你的引物二聚体很严重，设计的时候着重注意，NAC有条带说明你的RNA有基因组污染，下次做个NTC阴性对照
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

上官慧
16楼2012-05-17 18:36:36
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上官慧

铁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-17 18:36:36:
无论你的体系有没有污染，你的引物质量是不合格的。重新设计引物吧，你的引物二聚体很严重，设计的时候着重注意，NAC有条带说明你的RNA有基因组污染，下次做个NTC阴性对照

不好意思，我想问一下NAC和NTC是什么呢？NTC怎么做呢
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17楼2012-05-18 09:01:17
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孙启亮

金虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-18 09:01:17:
不好意思，我想问一下NAC和NTC是什么呢？NTC怎么做呢

推荐你看个帖子http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4318668
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18楼2012-05-18 10:48:39
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叶倾意

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-18 15:35:42
[1]你的目的条带应该是出来的
[2]但是你的引物特异性不太好，换个引物吧。。。
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自知者智 自胜者勇 自暴者弃 自强者成
19楼2012-05-18 14:51:21
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上官慧

铁虫 (初入文坛)
求一条经典的β-actin引物，用于cDNA的鉴定。
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20楼2012-05-23 10:03:17
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