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上官慧

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 13:28:35:
我大概明白了你的意思了,你的第一条亮带就是在marker200的那个应该就是你的目的带啊,其它的应该是非特异性扩增,最下面糊的那条是引物二聚体,你这不叫没P出来,你这明明就是P出来了啊,只是引物特意性不好,至 ...

阴性对照是想验证一下提的rna有没有基因组dna,加了rna也不会p出来才对呀~
11楼2012-05-17 16:27:28
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 16:27:28:
阴性对照是想验证一下提的rna有没有基因组dna,加了rna也不会p出来才对呀~

按理说应该P不出来的,如果要看有没有DNA污染的话最好在内含子区设计一段引物去P,如果能P出来就说明有DNA污染了!
12楼2012-05-17 16:33:25
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上官慧

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 16:33:25:
按理说应该P不出来的,如果要看有没有DNA污染的话最好在内含子区设计一段引物去P,如果能P出来就说明有DNA污染了!

谢谢啦~
13楼2012-05-17 16:51:11
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 12:07:23:
反转录之后没有定量,应该怎么定量呢?50ul的体系,加1ul的模板。模板浓度0.1ug/ul

没定量怎么算出来的 模板浓度?
14楼2012-05-17 17:28:30
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上官慧

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-17 17:28:30:
没定量怎么算出来的 模板浓度?

反转录试剂盒上写的,total rna用2ug最后体积是20ul,得出模板浓度时0.1ug/ul
15楼2012-05-17 18:20:40
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 鼓励应助 2012-05-18 15:35:23
无论你的体系有没有污染,你的引物质量是不合格的。重新设计引物吧,你的引物二聚体很严重,设计的时候着重注意,NAC有条带说明你的RNA有基因组污染,下次做个NTC阴性对照

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

16楼2012-05-17 18:36:36
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上官慧

铁虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-17 18:36:36:
无论你的体系有没有污染,你的引物质量是不合格的。重新设计引物吧,你的引物二聚体很严重,设计的时候着重注意,NAC有条带说明你的RNA有基因组污染,下次做个NTC阴性对照

不好意思,我想问一下NAC和NTC是什么呢?NTC怎么做呢
17楼2012-05-18 09:01:17
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孙启亮

金虫 (著名写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-18 09:01:17:
不好意思,我想问一下NAC和NTC是什么呢?NTC怎么做呢

推荐你看个帖子http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4318668
18楼2012-05-18 10:48:39
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叶倾意

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-18 15:35:42
[1]你的目的条带应该是出来的
[2]但是你的引物特异性不太好,换个引物吧。。。
自知者智 自胜者勇 自暴者弃 自强者成
19楼2012-05-18 14:51:21
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上官慧

铁虫 (初入文坛)

求一条经典的β-actin引物,用于cDNA的鉴定。
20楼2012-05-23 10:03:17
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