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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取注意事项 和心得
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

[求助] RNA 提取注意事项 和心得

由于上次RNA提取质量不好，这次准备东山再起；
在这希望 各界人士能给点自己的经验和心得，小生不胜感激；

细胞：NHDF
药物： fucosterol
处理时间： 24h
提取试剂：trizol
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一手生存，一手梦想
1楼2013-02-12 15:26:57
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士
★
sunzhengwang(金币+1): 谢谢参与
great
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蓝精灵
2楼2013-02-12 17:38:36
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★
sunzhengwang(金币+1): 谢谢参与
是采用液氮研磨法提取的么？
你的研钵等器具怎么处理的？
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3楼2013-02-12 22:33:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-02-14 17:58:40
质量不好是指降解还是纯度不好呢？如果是纯度不好，注意初始样品细胞与TRIZOL的比例，提取过程中混合充分，不要吸取中间层。如果是降解问题，要注意破碎细胞时的温度，器具、枪头什么的。
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4楼2013-02-13 00:34:20
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-02-12 22:33:42
是采用液氮研磨法提取的么？
你的研钵等器具怎么处理的？

我们就直接在clean bench 里面， triol加到100ml 培养皿里面，直接把细胞刮下来，然后转移到EP管里面；
没有用液氮，也没有研钵，是不是很不科学？
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一手生存，一手梦想
5楼2013-02-13 20:05:15
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-13 00:34:20
质量不好是指降解还是纯度不好呢？如果是纯度不好，注意初始样品细胞与TRIZOL的比例，提取过程中混合充分，不要吸取中间层。如果是降解问题，要注意破碎细胞时的温度，器具、枪头什么的。

A260/280 正常（1.9-2.0）；
A260/A230很小，只有0.7左右；
初始的trizol 100ml培养皿+1ml trizol;
吸取了500ul；
破碎在clean bench 里面，没有放冰上
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一手生存，一手梦想
6楼2013-02-13 20:08:15
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mlanqiang at 2013-02-12 17:38:36
great

how come?
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一手生存，一手梦想
7楼2013-02-13 20:11:05
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by sunzhengwang at 2013-02-13 20:08:15
A260/280 正常（1.9-2.0）；
A260/A230很小，只有0.7左右；
初始的trizol 100ml培养皿+1ml trizol;
吸取了500ul；
破碎在clean bench 里面，没有放冰上...

A260/A230小一般是样品中有有机杂质，是提取过程中污染的。这些是否影响下面实验需要具分析。你可以注意在离心分相后小心不要吸到有机相。如果提的RNA浓度和量还可以的话，可以跑电泳看一下带型。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2013-02-14 14:45:00
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-14 14:45:00
A260/A230小一般是样品中有有机杂质，是提取过程中污染的。这些是否影响下面实验需要具分析。你可以注意在离心分相后小心不要吸到有机相。如果提的RNA浓度和量还可以的话，可以跑电泳看一下带型。...

9楼2013-02-15 18:17:41
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no1xiaowu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-14 14:45:00
A260/A230小一般是样品中有有机杂质，是提取过程中污染的。这些是否影响下面实验需要具分析。你可以注意在离心分相后小心不要吸到有机相。如果提的RNA浓度和量还可以的话，可以跑电泳看一下带型。...

RNA的浓度一般多少比较好呢？
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10楼2015-12-31 22:57:40
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