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821078607

银虫 (小有名气)


[交流] RNA提取表征

请教大家,我从细胞中提取出来的总RNA加入不同量的水进行稀释OD260/OD280会发生变化从2.1(稀释四十倍)变成了1.7(稀释八十倍),那么要怎样确定水量,还有我提取的RNA能不能用呢
具体电泳表征该怎么做啊?我做了几次都没成功,大家都用什么染料,EB吗?电泳电压一般多少V,跑多长时间呢?
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)



821078607(金币+1): 谢谢参与
你用的是eppendorf的那个微量核酸定量仪测定的吧。误差很大的。你可以试试看,应该也能用的。
电泳用100V跑30-40min就行了。
2楼2012-05-23 22:19:43
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holyala

木虫 (著名写手)


★ ★ ★
821078607(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-24 13:52:12
RNA能不能用这个问题还真难回答,你没有电泳图,不知道有没有降解。
电泳怎么跑,要看你是为啥跑了,只是检测的话,用RNA酶抑制剂(如RNaseZAP)把电泳槽什么的都擦干净,配一块普通的1.2%琼脂糖胶,120V跑15min就够了,理想状态能看到两条rRNA条带,没有严重smear就说明这个样品还不错咯。最好有marker,DL2000就行。如果跑电泳是为了回收什么的...那就得做甲醛变性电泳或者PAGE,这个LZ自己查文献吧。
4楼2012-05-24 10:16:00
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)



821078607(金币+1): 谢谢参与
我用的染料是Gelred  加的量是30ml 1.0%的琼脂糖凝胶加0.8ul。用EB也可以。电压200v 15min就可以,因为电压大跑得快,RNA降解的几率就小~
5楼2012-05-24 13:16:45
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neu234

木虫之王 (文学泰斗)



821078607(金币+1): 谢谢参与
学习贴
6楼2012-05-24 21:42:32
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简单回复
2012-05-23 22:42   回复  
821078607(金币+1): 谢谢参与
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