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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取表征
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821078607

银虫 (小有名气)

[交流] RNA提取表征

请教大家，我从细胞中提取出来的总RNA加入不同量的水进行稀释OD260/OD280会发生变化从2.1（稀释四十倍）变成了1.7（稀释八十倍），那么要怎样确定水量，还有我提取的RNA能不能用呢
具体电泳表征该怎么做啊？我做了几次都没成功，大家都用什么染料，EB吗？电泳电压一般多少V，跑多长时间呢？
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1楼 2012-05-23 22:12:53
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)
★
821078607(金币+1): 谢谢参与
我用的染料是Gelred  加的量是30ml 1.0%的琼脂糖凝胶加0.8ul。用EB也可以。电压200v 15min就可以，因为电压大跑得快，RNA降解的几率就小~
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5楼2012-05-24 13:16:45
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)
★
821078607(金币+1): 谢谢参与
你用的是eppendorf的那个微量核酸定量仪测定的吧。误差很大的。你可以试试看，应该也能用的。
电泳用100V跑30-40min就行了。
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2楼2012-05-23 22:19:43
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holyala

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
821078607(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-24 13:52:12
RNA能不能用这个问题还真难回答，你没有电泳图，不知道有没有降解。
电泳怎么跑，要看你是为啥跑了，只是检测的话，用RNA酶抑制剂（如RNaseZAP）把电泳槽什么的都擦干净，配一块普通的1.2%琼脂糖胶，120V跑15min就够了，理想状态能看到两条rRNA条带，没有严重smear就说明这个样品还不错咯。最好有marker，DL2000就行。如果跑电泳是为了回收什么的...那就得做甲醛变性电泳或者PAGE，这个LZ自己查文献吧。
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4楼2012-05-24 10:16:00
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