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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取的新手~~~~求助各位高手
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guyue900905

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取的新手~~~~求助各位高手

我是提取RNA的新手，想请教一下研钵在用之前该怎么处理比较好？为什么我包着锡纸180度三小时烘完，研钵的杵头都黑了，一磨研钵里都是脏东西，请问是因为锡纸没有包好还是别的原因？该怎么处理啊？
  另外。我还想求教一下，用来跑电泳的槽子，梳子什么的该怎么处理啊？
  还得再请教一下，实验中的氯仿，异丙醇，酒精以及plus，用不用分装开啊？如果用的话该怎么分装啊？
  谢谢啦，我的实验老是不成功，而且260/230还特别低，郁闷啊，我都做了快一个月了。谢谢啦！
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1楼2012-08-01 11:33:44
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-01 20:56:09
amisking: 回帖置顶 2012-08-01 20:56:11
guyue900905: 金币+2, ★有帮助 2012-08-02 16:14:15
首先是研钵的问题，用过以后要先用水清洗干净，后用depc水浸泡过夜，在高温灭菌半个小（也可以用酒精烧）
其次，在提取过程中，1.在研钵内研磨时，一定要在液氮下，否则样品会降解2.在萃取时，用的枪头盒EP管，都浸泡depc水过夜，且高温灭菌的
最后，试剂，苯酚氯仿异戊醇：25:24:1，是要装在一个棕深色瓶内，混匀再用
最后，切忌操作要快，因为RNA极容易降解，且尽量在低温下操作
祝你成功
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4楼2012-08-01 14:38:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:41:07
我一般是研钵一般用蒸馏水洗后，在用无水乙醇清洗，倒去酒精点燃，然后液氮冷却，基本都成功。给你提rna几个建议：1 液氮研磨要充分；2 整个过程要无污染，手套口罩必须之外还得注意枪头，离心管的无菌，建议用进口的，也不需要自己灭菌； 3 跑电泳时要与跑dna的分开，单独使用电泳槽
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5楼2012-08-01 15:31:58
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:06:42
研钵我都没处理，直接先用液氮冷却，没太大关系的，你要真想高温处理的话，也应该把它洗干净，黑色的东西肯定是没洗干净；有机溶剂可以分开装，其他跑胶用的器具可以不处理
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2楼2012-08-01 12:38:31
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:06:51
提RNA最重要的是最后几步，尤其是溶解RNA的管子一定要用DEPC水处理。前面的步骤可以稍微粗放点，第一步我都是用未处理的EP管，先加入TRIZOL，然后把样品加入，RNA在TRIZOL里是稳定的。
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3楼2012-08-01 13:09:28
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guyue900905

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by julin1002 at 2012-08-01 14:38:44
首先是研钵的问题，用过以后要先用水清洗干净，后用depc水浸泡过夜，在高温灭菌半个小（也可以用酒精烧）
其次，在提取过程中，1.在研钵内研磨时，一定要在液氮下，否则样品会降解2.在萃取时，用的枪头盒EP管，都浸 ...

你好  谢谢你的建议  但是我在操作的过程中都很按照规定的步骤啊，我先往研钵里倒少许液氮，使其充分冷却，然后从冻存管里取出样品，加液氮研磨，然后加入plus，再到液氮继续磨，待其全部变为粉末状就放置在一边等待期融化，然后用枪头吸入管中。麻烦帮我看一下这样做对么？
太感谢了
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6楼2012-08-01 20:52:31
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-08-01 15:31:58
我一般是研钵一般用蒸馏水洗后，在用无水乙醇清洗，倒去酒精点燃，然后液氮冷却，基本都成功。给你提rna几个建议：1 液氮研磨要充分；2 整个过程要无污染，手套口罩必须之外还得注意枪头，离心管的无菌，建议用进口 ...

操作应该是不会有什么问题，有可能是你研磨得不充分，或许是萃取的次数太多
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7楼2012-08-02 09:00:02
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xw19880905

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by guyue900905 at 2012-08-01 20:52:31
你好  谢谢你的建议  但是我在操作的过程中都很按照规定的步骤啊，我先往研钵里倒少许液氮，使其充分冷却，然后从冻存管里取出样品，加液氮研磨，然后加入plus，再到液氮继续磨，待其全部变为粉末状就放置在一边等 ...

问题不大，建议融化过程中也轻微的研磨一下，这样有助于融化和混匀
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8楼2012-08-02 10:00:28
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guyue900905

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-08-02 10:00:28
问题不大，建议融化过程中也轻微的研磨一下，这样有助于融化和混匀...

你好  我想问问我的样品一直冻在负70度，可以么？没在负80
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9楼2012-08-02 10:10:35
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by guyue900905 at 2012-08-02 10:10:35
你好  我想问问我的样品一直冻在负70度，可以么？没在负80...

可以，但是最好冻存时间不要过长
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10楼2012-08-02 11:45:52
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