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guyue900905

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA提取的新手~~~~求助各位高手

我是提取RNA的新手,想请教一下研钵在用之前该怎么处理比较好?为什么我包着锡纸180度三小时烘完,研钵的杵头都黑了,一磨研钵里都是脏东西,请问是因为锡纸没有包好还是别的原因?该怎么处理啊?
  另外。我还想求教一下,用来跑电泳的槽子,梳子什么的该怎么处理啊?
  还得再请教一下,实验中的氯仿,异丙醇,酒精以及plus,用不用分装开啊?如果用的话该怎么分装啊?
  谢谢啦,我的实验老是不成功,而且260/230还特别低,郁闷啊,我都做了快一个月了。谢谢啦!
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xw19880905

新虫 (小有名气)

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★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:41:07
我一般是研钵一般用蒸馏水洗后,在用无水乙醇清洗,倒去酒精点燃,然后液氮冷却,基本都成功。给你提rna几个建议:1 液氮研磨要充分;2 整个过程要无污染,手套口罩必须之外还得注意枪头,离心管的无菌,建议用进口的,也不需要自己灭菌; 3 跑电泳时要与跑dna的分开,单独使用电泳槽
5楼2012-08-01 15:31:58
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:06:42
研钵我都没处理,直接先用液氮冷却,没太大关系的,你要真想高温处理的话,也应该把它洗干净,黑色的东西肯定是没洗干净;有机溶剂可以分开装,其他跑胶用的器具可以不处理
2楼2012-08-01 12:38:31
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-01 20:56:09
amisking: 回帖置顶 2012-08-01 20:56:11
guyue900905: 金币+2, 有帮助 2012-08-02 16:14:15
首先是研钵的问题,用过以后要先用水清洗干净,后用depc水浸泡过夜,在高温灭菌半个小(也可以用酒精烧)
其次,在提取过程中,1.在研钵内研磨时,一定要在液氮下,否则样品会降解2.在萃取时,用的枪头盒EP管,都浸泡depc水过夜,且高温灭菌的
最后,试剂,苯酚氯仿异戊醇:25:24:1,是要装在一个棕深色瓶内,混匀再用
最后,切忌操作要快,因为RNA极容易降解,且尽量在低温下操作
祝你成功
4楼2012-08-01 14:38:44
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普通回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-01 14:06:51
提RNA最重要的是最后几步,尤其是溶解RNA的管子一定要用DEPC水处理。前面的步骤可以稍微粗放点,第一步我都是用未处理的EP管,先加入TRIZOL,然后把样品加入,RNA在TRIZOL里是稳定的。
3楼2012-08-01 13:09:28
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guyue900905

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by julin1002 at 2012-08-01 14:38:44
首先是研钵的问题,用过以后要先用水清洗干净,后用depc水浸泡过夜,在高温灭菌半个小(也可以用酒精烧)
其次,在提取过程中,1.在研钵内研磨时,一定要在液氮下,否则样品会降解2.在萃取时,用的枪头盒EP管,都浸 ...

你好  谢谢你的建议  但是我在操作的过程中都很按照规定的步骤啊,我先往研钵里倒少许液氮,使其充分冷却,然后从冻存管里取出样品,加液氮研磨,然后加入plus,再到液氮继续磨,待其全部变为粉末状就放置在一边等待期融化,然后用枪头吸入管中。麻烦帮我看一下这样做对么?
太感谢了
6楼2012-08-01 20:52:31
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-08-01 15:31:58
我一般是研钵一般用蒸馏水洗后,在用无水乙醇清洗,倒去酒精点燃,然后液氮冷却,基本都成功。给你提rna几个建议:1 液氮研磨要充分;2 整个过程要无污染,手套口罩必须之外还得注意枪头,离心管的无菌,建议用进口 ...

操作应该是不会有什么问题,有可能是你研磨得不充分,或许是萃取的次数太多
7楼2012-08-02 09:00:02
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xw19880905

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by guyue900905 at 2012-08-01 20:52:31
你好  谢谢你的建议  但是我在操作的过程中都很按照规定的步骤啊,我先往研钵里倒少许液氮,使其充分冷却,然后从冻存管里取出样品,加液氮研磨,然后加入plus,再到液氮继续磨,待其全部变为粉末状就放置在一边等 ...

问题不大,建议融化过程中也轻微的研磨一下,这样有助于融化和混匀
8楼2012-08-02 10:00:28
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guyue900905

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-08-02 10:00:28
问题不大,建议融化过程中也轻微的研磨一下,这样有助于融化和混匀...

你好  我想问问我的样品一直冻在负70度,可以么?没在负80
9楼2012-08-02 10:10:35
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xw19880905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by guyue900905 at 2012-08-02 10:10:35
你好  我想问问我的样品一直冻在负70度,可以么?没在负80...

可以,但是最好冻存时间不要过长
10楼2012-08-02 11:45:52
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