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zky8996

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】RNA提取问题求助 已有10人参与

我最近在做RNA提取,样本是鱼类肝脏,用TRIzol提RNA,按照说明书步骤做。加入异丙醇离心后看不到沉淀,倒掉上清时管底及管壁上会有白色沉淀出现,并随着上清顺着管壁流下,这些沉淀是什么东西?RNA沉淀不应该是在底部透明的沉淀吗?
这是什么原因呢?我测得OD值260/280小于1.7。
我把TRIzol、氯仿、异丙醇都换过了还是有这种现象。
请各位高人解答啊!
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jasco

木虫 (正式写手)


zky8996(金币+1):谢谢参与
白色应该是蛋白, 肝脏组织的蛋白含量较高,沉淀前可用酚氯仿异戊醇抽提一下,

另外,肝脏组织rna酶含量较高,注意防止rna降解
2楼2010-05-26 14:43:04
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amilie030312

金虫 (正式写手)


zky8996(金币+1):谢谢参与
多加TR进去,肝脏核糖核酸没含量高,所以需要更多的裂解液进去。
3楼2010-05-26 14:45:45
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xyls6868

新虫 (小有名气)


zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏含有较多的RNA酶,注意防止降解
4楼2010-05-26 17:02:09
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zzh888

银虫 (小有名气)


zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏含有较多的RNA酶,注意防止降解
5楼2010-05-26 19:18:42
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cqyniu

金虫 (小有名气)


zky8996(金币+1):谢谢参与
异丙醇沉淀之前用氯仿抽提一下,去除蛋白和DNA
6楼2010-05-26 19:42:25
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zhouyinggyf

金虫 (正式写手)


zky8996(金币+1):谢谢参与
楼上大家说的很是详细呀,RNA可不是好提的东东,特别是对所提的样本不是很了解的时候
7楼2010-05-26 23:12:09
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ztluli

金虫 (正式写手)


zky8996(金币+1):谢谢参与
实验过程多注意下小细节,多用酚氯仿异戊醇抽提几次。反正RNA不好提,再接再厉!
无所为而无所谓,无所谓而无所为!
8楼2010-05-27 09:39:53
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ltakashi

银虫 (小有名气)


zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏含有较多的RNA酶,注意防止降解
9楼2010-05-27 09:44:54
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liyong1981

金虫 (正式写手)



zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏中不好提,你的条件控制的要十分严格才好,白色沉淀是蛋白质吧~RNA不是很白,而且很容易溶解,你多加245:24:1抽几次吧~
10楼2010-05-27 15:43:21
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