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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA提取问题求助
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zky8996

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】RNA提取问题求助 已有10人参与

我最近在做RNA提取，样本是鱼类肝脏，用TRIzol提RNA，按照说明书步骤做。加入异丙醇离心后看不到沉淀，倒掉上清时管底及管壁上会有白色沉淀出现，并随着上清顺着管壁流下，这些沉淀是什么东西？RNA沉淀不应该是在底部透明的沉淀吗？
这是什么原因呢？我测得OD值260/280小于1.7。
我把TRIzol、氯仿、异丙醇都换过了还是有这种现象。
请各位高人解答啊！
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1楼 2010-05-26 14:12:57
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jasco

木虫 (正式写手)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
白色应该是蛋白， 肝脏组织的蛋白含量较高，沉淀前可用酚氯仿异戊醇抽提一下，

另外，肝脏组织rna酶含量较高，注意防止rna降解
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2楼2010-05-26 14:43:04
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
多加TR进去，肝脏核糖核酸没含量高，所以需要更多的裂解液进去。
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3楼2010-05-26 14:45:45
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xyls6868

新虫 (小有名气)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏含有较多的RNA酶，注意防止降解
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4楼2010-05-26 17:02:09
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zzh888

银虫 (小有名气)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏含有较多的RNA酶，注意防止降解
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5楼2010-05-26 19:18:42
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
异丙醇沉淀之前用氯仿抽提一下，去除蛋白和DNA
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6楼2010-05-26 19:42:25
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zhouyinggyf

金虫 (正式写手)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
楼上大家说的很是详细呀，RNA可不是好提的东东，特别是对所提的样本不是很了解的时候
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7楼2010-05-26 23:12:09
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ztluli

金虫 (正式写手)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
实验过程多注意下小细节，多用酚氯仿异戊醇抽提几次。反正ＲＮＡ不好提，再接再厉！
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无所为而无所谓，无所谓而无所为！
8楼2010-05-27 09:39:53
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ltakashi

银虫 (小有名气)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏含有较多的RNA酶，注意防止降解
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9楼2010-05-27 09:44:54
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
zky8996(金币+1):谢谢参与
肝脏中不好提，你的条件控制的要十分严格才好，白色沉淀是蛋白质吧～RNA不是很白，而且很容易溶解，你多加245：24：1抽几次吧～
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10楼2010-05-27 15:43:21
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