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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取后，电泳显示全部为5s处弥散片段，求帮助
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s10010251

木虫 (小有名气)

[交流] RNA 提取后，电泳显示全部为5s处弥散片段，求帮助 已有10人参与

RNA 提取后，电泳显示全部为5s处弥散片段，在18s,28s处完全没有任何条带，非常干净。提取过程中注意事项基本做到。电泳时间20分钟，冰块制冷。不知道哪里出了问题，关键在于即使有降解，无论如何也不会降解成如此彻底。求高手帮助。。。
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1楼 2012-09-14 22:06:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
嗯.......................
       如果很注意过程的话，这么彻底的降解没有见过，想问下你的初始样品会不会有问题，是收获样品过程中就有降解了，还是样品的种类比较麻烦都不好说（有些样品如动物某些器官是RNase富含的）。
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Let God do with it as He wills
3楼2012-09-15 11:05:57
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普通回帖

weishu杯子

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是跑胶的时间过长，不会影响反转录的。
我们跑RNA通常是增大电压，跑几分钟就可以了。
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快乐源于生活!!
2楼2012-09-15 10:51:29
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-19 15:01:19
RNA电泳
1，更换新鲜的缓冲液
2，高电压，快速跑
3，要是闲着无聊了，可以把电泳槽等用过氧化氢处理下，详见分子克隆
4，是不是你提的技术本身有问题，自己问过师兄师姐了么。。。
5，你用的试剂和管子都无RNASE了么。。。
这个问题多了，你一项项排除下
要不你下次跑的时候 带个人家做好的RNA，作为对照，就把你电泳体系的问题解决了
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4楼2012-09-15 13:43:11
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yananhl

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-15 11:05:57
嗯.......................
       如果很注意过程的话，这么彻底的降解没有见过，想问下你的初始样品会不会有问题，是收获样品过程中就有降解了，还是样品的种类比较麻烦都不好说（有些样品如动物某些器官是RNase ...

动物某些器官是RNase富含的.请问哪些器官？
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5楼2012-09-15 14:13:29
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by yananhl at 2012-09-15 14:13:29
动物某些器官是RNase富含的.请问哪些器官？...

嗯....................
       个人记忆中 胰脏最麻烦 RNase含量高同时不容易变性的
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Let God do with it as He wills
6楼2012-09-15 17:48:20
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weishu杯子 at 2012-09-15 10:51:29
可能是跑胶的时间过长，不会影响反转录的。
我们跑RNA通常是增大电压，跑几分钟就可以了。

我在做RACE，需要纯化mRNA， 所有片段完整性很重要
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7楼2012-09-16 19:58:28
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-15 11:05:57
嗯.......................
       如果很注意过程的话，这么彻底的降解没有见过，想问下你的初始样品会不会有问题，是收获样品过程中就有降解了，还是样品的种类比较麻烦都不好说（有些样品如动物某些器官是RNase ...

组织是蝗虫的触角，拔下来后直接放进液氮池，然后研磨加Trizol， 应该也没问题
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8楼2012-09-16 19:59:59
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-09-15 13:43:11
RNA电泳
1，更换新鲜的缓冲液
2，高电压，快速跑
3，要是闲着无聊了，可以把电泳槽等用过氧化氢处理下，详见分子克隆
4，是不是你提的技术本身有问题，自己问过师兄师姐了么。。。
5，你用的试剂和管子都无RNA ...

最后一条好主意！上边几条基本都注意到了，电泳槽用氢氧化钠浸泡过，EB也是新鲜配制的
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9楼2012-09-16 20:01:03
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junminh

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把图放上，没有图只凭一句话，都是在猜。如果只有5S，降解肯定很严重，需要分析降解的原因。或者根本就没有提出RNA
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10楼2012-09-19 10:23:44
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