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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取后，电泳显示全部为5s处弥散片段，求帮助
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tupac225

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新提取吧，降解的太厉害。
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coasttocoast。
11楼2012-09-19 10:42:54
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by tupac225 at 2012-09-19 10:42:54
重新提取吧，降解的太厉害。

已解决问题，loading buffer出现问题
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12楼2012-09-20 08:00:31
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by s10010251 at 2012-09-16 20:01:03
最后一条好主意！上边几条基本都注意到了，电泳槽用氢氧化钠浸泡过，EB也是新鲜配制的...

我说的最后一条是最基本的，呃。。。
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13楼2012-09-20 17:33:36
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494750284

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-09-21 14:23:08
1、你测没测过RNA浓度？电泳条带发光那得看你的RNA浓度是不是足够。1000ng/微升的你可以看到明显的条带，要是20ng/微升的，就不一定了吧。
2、以前提过RNA没有，质量如何？如果提过，我觉得基本错误应该是不回犯的。
3、你提蝗虫的触角，用量多少？如果只是几只蝗虫的触角，提的RNA量一定不多。
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14楼2012-09-20 20:54:57
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 494750284 at 2012-09-20 20:54:57
1、你测没测过RNA浓度？电泳条带发光那得看你的RNA浓度是不是足够。1000ng/微升的你可以看到明显的条带，要是20ng/微升的，就不一定了吧。
2、以前提过RNA没有，质量如何？如果提过，我觉得基本错误应该是不回犯的 ...

2000ng/ul, 之前提过很多次，50根触角。问题已解决，loading buffer出现问题。谢谢
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15楼2012-09-21 11:54:15
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-09-20 17:33:36
我说的最后一条是最基本的，呃。。。...

问题已解决，loading buffer出现问题，更换出现明显三条带。但不知道为何loading buffer 会有如此大威力。。
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16楼2012-09-21 11:55:35
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
都降解了，操作速度要快
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一手生存，一手梦想
17楼2013-02-28 09:59:35
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cisong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by s10010251 at 2012-09-20 08:00:31
已解决问题，loading buffer出现问题...

您好，怎么确定是loading buffer 出问题了啊？是怎么出问题的啊？
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科研工作者
18楼2013-08-29 21:51:23
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liangpz

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想问一下你之前用的什么，后来又换了什么loading buffer？
我也是电泳后只有一条弥散带，用的是6X DNA loading buffer。
但是OD没问题，都是是2.0左右。
谢谢了~
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19楼2013-12-11 15:36:21
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by liangpz at 2013-12-11 15:36:21
想问一下你之前用的什么，后来又换了什么loading buffer？
我也是电泳后只有一条弥散带，用的是6X DNA loading buffer。
但是OD没问题，都是是2.0左右。
谢谢了~

还是同样的loading buffer，只不过更换了一管新打开的，可能之前的那管被污染了。
你也遇到了同样的问题？提取的时候没有问题吧？
这种情况5S弥散的居多，如果整个泳道全部弥散，就要考虑电泳有没有问题，
比如电泳时buffer的温度，电泳buffer和器具有没有被RNase污染，等等
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20楼2013-12-12 08:47:01
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