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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取后，电泳显示全部为5s处弥散片段，求帮助
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s10010251

木虫 (小有名气)

[交流] RNA 提取后，电泳显示全部为5s处弥散片段，求帮助 已有10人参与

RNA 提取后，电泳显示全部为5s处弥散片段，在18s,28s处完全没有任何条带，非常干净。提取过程中注意事项基本做到。电泳时间20分钟，冰块制冷。不知道哪里出了问题，关键在于即使有降解，无论如何也不会降解成如此彻底。求高手帮助。。。
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1楼 2012-09-14 22:06:20
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s10010251

木虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by liangpz at 2013-12-11 15:36:21
想问一下你之前用的什么，后来又换了什么loading buffer？
我也是电泳后只有一条弥散带，用的是6X DNA loading buffer。
但是OD没问题，都是是2.0左右。
谢谢了~

还是同样的loading buffer，只不过更换了一管新打开的，可能之前的那管被污染了。
你也遇到了同样的问题？提取的时候没有问题吧？
这种情况5S弥散的居多，如果整个泳道全部弥散，就要考虑电泳有没有问题，
比如电泳时buffer的温度，电泳buffer和器具有没有被RNase污染，等等
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20楼2013-12-12 08:47:01
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weishu杯子

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是跑胶的时间过长，不会影响反转录的。
我们跑RNA通常是增大电压，跑几分钟就可以了。
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快乐源于生活!!
2楼2012-09-15 10:51:29
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
嗯.......................
       如果很注意过程的话，这么彻底的降解没有见过，想问下你的初始样品会不会有问题，是收获样品过程中就有降解了，还是样品的种类比较麻烦都不好说（有些样品如动物某些器官是RNase富含的）。
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Let God do with it as He wills
3楼2012-09-15 11:05:57
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-19 15:01:19
RNA电泳
1，更换新鲜的缓冲液
2，高电压，快速跑
3，要是闲着无聊了，可以把电泳槽等用过氧化氢处理下，详见分子克隆
4，是不是你提的技术本身有问题，自己问过师兄师姐了么。。。
5，你用的试剂和管子都无RNASE了么。。。
这个问题多了，你一项项排除下
要不你下次跑的时候 带个人家做好的RNA，作为对照，就把你电泳体系的问题解决了
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4楼2012-09-15 13:43:11
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