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s10010251

木虫 (小有名气)

[交流] RNA 提取后,电泳显示全部为5s处弥散片段,求帮助 已有10人参与

RNA 提取后,电泳显示全部为5s处弥散片段,在18s,28s处完全没有任何条带,非常干净。提取过程中注意事项基本做到。电泳时间20分钟,冰块制冷。不知道哪里出了问题,关键在于即使有降解,无论如何也不会降解成如此彻底。求高手帮助。。。
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s10010251

木虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by liangpz at 2013-12-11 15:36:21
想问一下你之前用的什么,后来又换了什么loading buffer?
我也是电泳后只有一条弥散带,用的是6X DNA loading buffer。
但是OD没问题,都是是2.0左右。
谢谢了~

还是同样的loading buffer,只不过更换了一管新打开的,可能之前的那管被污染了。
你也遇到了同样的问题?提取的时候没有问题吧?
这种情况5S弥散的居多,如果整个泳道全部弥散,就要考虑电泳有没有问题,
比如电泳时buffer的温度,电泳buffer和器具有没有被RNase污染,等等
20楼2013-12-12 08:47:01
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weishu杯子

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是跑胶的时间过长,不会影响反转录的。
我们跑RNA通常是增大电压,跑几分钟就可以了。
快乐源于生活!!
2楼2012-09-15 10:51:29
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
嗯.......................
       如果很注意过程的话,这么彻底的降解没有见过,想问下你的初始样品会不会有问题,是收获样品过程中就有降解了,还是样品的种类比较麻烦都不好说(有些样品如动物某些器官是RNase富含的)。
Let God do with it as He wills
3楼2012-09-15 11:05:57
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-19 15:01:19
RNA电泳
1,更换新鲜的缓冲液
2,高电压,快速跑
3,要是闲着无聊了,可以把电泳槽等用过氧化氢处理下,详见分子克隆
4,是不是你提的技术本身有问题,自己问过师兄师姐了么。。。
5,你用的试剂和管子都无RNASE了么。。。
这个问题多了,你一项项排除下
要不你下次跑的时候 带个人家做好的RNA,作为对照,就把你电泳体系的问题解决了
4楼2012-09-15 13:43:11
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