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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

[求助] RNA 提取注意事项 和心得

由于上次RNA提取质量不好,这次准备东山再起;
在这希望 各界人士能给点自己的经验和心得,小生不胜感激;

细胞:NHDF
药物: fucosterol
处理时间: 24h
提取试剂:trizol
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一手生存,一手梦想
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-13 00:34:20
质量不好是指降解还是纯度不好呢?如果是纯度不好,注意初始样品细胞与TRIZOL的比例,提取过程中混合充分,不要吸取中间层。如果是降解问题,要注意破碎细胞时的温度,器具、枪头什么的。

A260/280 正常(1.9-2.0);
A260/A230很小,只有0.7左右;
初始的trizol 100ml培养皿+1ml trizol;
吸取了500ul;
破碎在clean bench 里面,没有放冰上
一手生存,一手梦想
6楼2013-02-13 20:08:15
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gaoyang636

木虫 (著名写手)


sunzhengwang(金币+1): 谢谢参与
是采用液氮研磨法提取的么?
你的研钵等器具怎么处理的?
3楼2013-02-12 22:33:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-02-14 17:58:40
质量不好是指降解还是纯度不好呢?如果是纯度不好,注意初始样品细胞与TRIZOL的比例,提取过程中混合充分,不要吸取中间层。如果是降解问题,要注意破碎细胞时的温度,器具、枪头什么的。
4楼2013-02-13 00:34:20
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-02-12 22:33:42
是采用液氮研磨法提取的么?
你的研钵等器具怎么处理的?

我们就直接在clean bench 里面, triol加到100ml 培养皿里面,直接把细胞刮下来,然后转移到EP管里面;
没有用液氮,也没有研钵,是不是很不科学?
一手生存,一手梦想
5楼2013-02-13 20:05:15
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