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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取时超净工作台的应用等？
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biofeixue

木虫 (著名写手)

[求助] RNA提取时超净工作台的应用等？

　　我提的是拟南芥叶的总RNA，在液氮研磨和加TRizol都是在外面做的，加入Trizol后都在工作台里做，且一直吹风，因一直提的RNA不好，特向大家请教注意事项。
　　我取0.1g拟南芥叶，加1　ml　trizol, 后面氯仿每1ml　trizol加了400微升，混匀离心后取了分三次取了0.48 ml，后又加了400微升氯仿，混匀离心后取了分两次取了0.３ ml，再加0.3 ml异丙醇，－２０度沉淀了1至２小时。
　　请问以上步骤又有哪些问题。
　　我提的RNA　OD260/280较低。
　　谢谢各位了！！！
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1楼 2011-05-31 15:37:39
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churchill87426

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-02 20:21:28
biofeixue(金币+2): 2011-06-06 05:51:08
biofeixue(金币+2): 2011-06-06 06:16:34
我的液氮研磨和TRIzol都是在超净台做的，而且不吹风，吹风会有空气流通，易带入RNA酶使RNA降解。 而且研磨用的器材区要高温处理，我是把研钵等250度4小时以上。
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2楼2011-06-02 20:06:00
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎应助 2011-06-02 23:00:13
biofeixue(金币+5): 2011-06-06 06:16:49
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-31 15:37:39:
　　我提的是拟南芥叶的总RNA，在液氮研磨和加TRizol都是在外面做的，加入Trizol后都在工作台里做，且一直吹风，因一直提的RNA不好，特向大家请教注意事项。
　　我取0.1g拟南芥叶，加1　ml　trizol, 后面氯仿每 ...

仔细看试剂盒说明书的操作步骤，给你下载一个takara的植物RNA提取试剂盒的说明书参看下~
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3楼2011-06-02 20:45:16
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

我全套都是在外面做的。找个人流少的角落就可以了，不用太担心。
OD260/OD280低，可能是污染了蛋白，估计是用氯仿抽提之后取上清时碰到了中间相。RNA要纯，量一般都够的，下次取上清时不要贪多啦。
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4楼2011-06-02 23:37:12
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kidtt

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 欢迎新虫交流。手机党哦~ 2011-06-03 09:18:18
biofeixue(金币+1): 2011-06-06 06:16:59
我是研磨在外面，后面的步骤用试剂盒提，在超净台做，超净台清理干净，不吹风。现在天气热了，手脚快点会更好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2011-06-03 00:29:08
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用好点的试剂盒，工具是一定要高温烘烤过，无菌操作台还是外面操作，我觉得都可以，不过应该注意的一点是，空气流动越少越好，操作速度越快越好。
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6楼2011-06-03 16:19:56
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蝈_屯

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫参与交流 2011-06-27 17:19:49
最后整个过程都在超净台里进行吧，尽量减少不必要的污染，还有就是是否用的枪头被污染，或者是裂解不充分导致RNA不够。。。
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7楼2011-06-26 22:06:47
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蝈_屯

新虫 (初入文坛)
不好意思，是最好不是最后。。。
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8楼2011-06-26 22:07:06
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巴格达的狗狗

新虫 (初入文坛)
不用在超净台做的，带口罩手套，用DEPC水煮过的枪头，就能得到较纯的RNA。
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9楼2012-03-14 16:08:58
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