24小时热门版块排行榜    

查看: 4082  |  回复: 8

biofeixue

木虫 (著名写手)

[求助] RNA提取时超净工作台的应用等?

  我提的是拟南芥叶的总RNA,在液氮研磨和加TRizol都是在外面做的,加入Trizol后都在工作台里做,且一直吹风,因一直提的RNA不好,特向大家请教注意事项。
  我取0.1g拟南芥叶,加1 ml trizol, 后面氯仿每1ml trizol加了400微升,混匀离心后取了分三次取了0.48 ml,后又加了400微升氯仿,混匀离心后取了分两次取了0.3 ml,再加0.3 ml异丙醇,-20度沉淀了1至2小时。
  请问以上步骤又有哪些问题。
  我提的RNA OD260/280较低。
  谢谢各位了!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

churchill87426

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-02 20:21:28
biofeixue(金币+2): 2011-06-06 05:51:08
biofeixue(金币+2): 2011-06-06 06:16:34
我的液氮研磨和TRIzol都是在超净台做的,而且不吹风,吹风会有空气流通,易带入RNA酶使RNA降解。 而且研磨用的器材区要高温处理,我是把研钵等250度4小时以上。
2楼2011-06-02 20:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎应助 2011-06-02 23:00:13
biofeixue(金币+5): 2011-06-06 06:16:49
引用回帖:
Originally posted by biofeixue at 2011-05-31 15:37:39:
  我提的是拟南芥叶的总RNA,在液氮研磨和加TRizol都是在外面做的,加入Trizol后都在工作台里做,且一直吹风,因一直提的RNA不好,特向大家请教注意事项。
  我取0.1g拟南芥叶,加1 ml trizol, 后面氯仿每 ...

仔细看试剂盒说明书的操作步骤,给你下载一个takara的植物RNA提取试剂盒的说明书参看下~
3楼2011-06-02 20:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

我全套都是在外面做的。找个人流少的角落就可以了,不用太担心。
OD260/OD280低,可能是污染了蛋白,估计是用氯仿抽提之后取上清时碰到了中间相。RNA要纯,量一般都够的,下次取上清时不要贪多啦。
4楼2011-06-02 23:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kidtt

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 欢迎新虫交流。手机党哦~ 2011-06-03 09:18:18
biofeixue(金币+1): 2011-06-06 06:16:59
我是研磨在外面,后面的步骤用试剂盒提,在超净台做,超净台清理干净,不吹风。现在天气热了,手脚快点会更好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2011-06-03 00:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用好点的试剂盒,工具是一定要高温烘烤过,无菌操作台还是外面操作,我觉得都可以,不过应该注意的一点是,空气流动越少越好,操作速度越快越好。
6楼2011-06-03 16:19:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蝈_屯

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎新虫参与交流 2011-06-27 17:19:49
最后整个过程都在超净台里进行吧,尽量减少不必要的污染,还有就是是否用的枪头被污染,或者是裂解不充分导致RNA不够。。。
7楼2011-06-26 22:06:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蝈_屯

新虫 (初入文坛)

不好意思,是最好不是最后。。。
8楼2011-06-26 22:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

巴格达的狗狗

新虫 (初入文坛)

不用在超净台做的,带口罩手套,用DEPC水煮过的枪头,就能得到较纯的RNA。
9楼2012-03-14 16:08:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 biofeixue 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:46 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 能否申诉? +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
信息提示
请填处理意见