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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA后跑电泳，条带非常不清晰怎么回事啊？我是新手，谢谢啦！
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guyue900905

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA后跑电泳，条带非常不清晰怎么回事啊？我是新手，谢谢啦！

我刚刚开始提取RNA，采用研钵提取的方法，提出的RNA测OD值，280/260还好在1.9~2.1之间，但是260/230特别的小，在1之下，操作中手套，口罩都有带，实在不知道是什么原因？想知道解决的方法。
     同时，我提取完就跑了电泳，但是28s条带、18s条带基本没有，5s条带很清楚，不知道怎么会降解的这么严重。跑电泳时，120伏，6分钟。
   谢谢啦！
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1楼 2012-07-16 22:39:58
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用什么方法提取的？一定要注意一些小细节
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2楼2012-07-17 09:49:26
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guyue900905

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-17 09:49:26
用什么方法提取的？一定要注意一些小细节

我用的是trizol法，测得的OD挺好的，电泳图特别差不知道为什么
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3楼2012-07-18 18:35:12
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

OD值测定结合跑胶鉴定比较好，你能传一下电泳图大家看看吗？
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4楼2012-07-18 19:10:40
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为很大可能性是你研磨过度的问题。
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5楼2012-07-18 19:24:24
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
guyue900905: 金币+2, ★有帮助 2012-08-02 16:14:53
提取rna应该注意环境清洁，容器、溶液无RNase。
你是用研磨的方法，所以特别注意低温防降解。
这是一些注意事项，希望对你有用：
1、将研钵，研杵，试剂瓶，容量瓶（配溶液用），三角瓶（溶胶用），药匙，玻璃棒等，用锡箔纸包住在烘箱中高温烘烤（180℃ 8hr，或200℃ 4hr）。
2、 配0.1％ DEPC-H2O：将DEPC母液按比例（H2O：DEPC＝1000：1）溶于双蒸水中，在37℃摇床上摇荡过夜，注意避免光照。DEPC-H2O主要作两种用途，一则用于处理试验中所用的器具，如不能高温烘烤的离心管等，除RNA酶，作此用途时不能高压灭菌，一则是用于配制提取过程中所用的溶液，如5M Nacl溶液，75%酒精等，配制前先要高压灭菌。故配制时或一次配两份，或配后用高温烘烤过的试剂瓶分装。注意：DEPC是挥发性有毒试剂，且见光分解，配制时注意防护，最好单独灭菌，配后避光保存。
3、 定购无RNase的专用枪头和Eppendorf管。否则，要用DEPC水处理并且摇荡过夜，然后高压灭菌。
4、用DEPC水配制Nacl溶液，75%酒精，及MOPS缓冲液等；氯仿、异丙醇，无水乙醇等用新开封的试剂，最好用烘烤过的试剂瓶分装。
⑤ 将电泳槽，制胶槽、梳子用0.1mol/L NaOH洗涤浸泡10-20min，然后用DEPC-H2O冲洗干净，再用75%的酒精擦拭干，备用。
⑥ 准备消毒的厚手套一双，乳胶手套若干双。
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coasttocoast。
6楼2012-07-18 22:41:54
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xjtu0025

新虫 (小有名气)
260/230很小，如果你是用trizol法提的，很简单你最后洗75%乙醇的时候多洗几遍，最后晾干的时候多晾一下。基本上洗4遍才能把值升到1以上，不会影响后期酶反应。
提RNA就三个窍门吧，低温，无酶，快。
我之前提也是新手，后来就算旁边有人跟我聊天。基本也没有什么降解的风险，数值也不错。注意所有接触到RNA的东西，你都要用DEPC水处理过。小强头建议你用新的盒装除酶的。。
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7楼2013-05-08 11:44:28
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