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guyue900905

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取RNA后跑电泳,条带非常不清晰怎么回事啊?我是新手,谢谢啦!

我刚刚开始提取RNA,采用研钵提取的方法,提出的RNA测OD值,280/260还好在1.9~2.1之间,但是260/230特别的小,在1之下,操作中手套,口罩都有带,实在不知道是什么原因?想知道解决的方法。
     同时,我提取完就跑了电泳,但是28s条带、18s条带基本没有,5s条带很清楚,不知道怎么会降解的这么严重。跑电泳时,120伏,6分钟。
   谢谢啦!
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

260/230很小,如果你是用trizol法提的,很简单你最后洗75%乙醇的时候多洗几遍,最后晾干的时候多晾一下。基本上洗4遍才能把值升到1以上,不会影响后期酶反应。
提RNA就三个窍门吧,低温,无酶,快。
我之前提也是新手,后来就算旁边有人跟我聊天。基本也没有什么降解的风险,数值也不错。注意所有接触到RNA的东西,你都要用DEPC水处理过。小强头建议你用新的盒装除酶的。。
7楼2013-05-08 11:44:28
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用什么方法提取的?一定要注意一些小细节
2楼2012-07-17 09:49:26
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guyue900905

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-17 09:49:26
用什么方法提取的?一定要注意一些小细节

我用的是trizol法,测得的OD挺好的,电泳图特别差不知道为什么
3楼2012-07-18 18:35:12
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

OD值测定结合跑胶鉴定比较好,你能传一下电泳图大家看看吗?
4楼2012-07-18 19:10:40
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