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安安90

木虫 (小有名气)

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专业: 农业昆虫学

[求助] 求助：RNA提取

求助：今天提取的RNA260/280在1.95-2.05之内，但是260/230有的1.2-1.4，也有的是1.9-2.2，接下来要进行反转录做相对荧光定量，这可以用吗？O(∩_∩)O谢谢

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1楼2013-11-12 20:45:59

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xipha

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-13 12:39:52

不确定楼主提取的是总RNA还是什么，但是以定量PCR而论，我记得我们组之前都不大看OD的，因为如果提出来质量不好的RNA 测OD也有可能正常。一般需要跑个电泳，用聚丙烯酰胺胶（分辨率比较高，琼脂糖应该也可以吧），只要分离相，TBE制胶TBE缓冲，上样孔看看蛋白多不多，RNA完整不完整（这个最重要），有没有分解的现象。好的RNA一般是一条连续的亮带，根据物种不同，核糖体RNA有一个亮度比例，一般电泳跑出来条带不正常的做实验常常会得到错误的结果。这个很久没做了，细节都忘光光了，不过应该可以查得到，希望有帮助。

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2楼2013-11-13 02:33:03

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zuoqi

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:20:10

重点看28s和18s两条带的亮度是否为2：1，符合了这个比例，而且5s很少就可以了。

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3楼2013-11-13 06:16:09

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安安90

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引用回帖:

2楼: Originally posted by xipha at 2013-11-13 02:33:03
不确定楼主提取的是总RNA还是什么，但是以定量PCR而论，我记得我们组之前都不大看OD的，因为如果提出来质量不好的RNA 测OD也有可能正常。一般需要跑个电泳，用聚丙烯酰胺胶（分辨率比较高，琼脂糖应该也可以吧），只 ...

提的是总RNA

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我的未来不是梦！

4楼2013-11-13 10:56:11

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