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zwenh1984

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教昆虫酒精标本RNA提取已有3人参与

最近在用Trizol法抽提白蚁的总RNA。第一次用的活体液氮研磨的,比较正常。
  问题一:第二次用的酒精标本,普通凝胶电泳检测的时候条带都集中在200bp左右,就是都降解了。第三次酒精的还是降解了,而且RNA很少。因为以前一直是做细胞的,组织这块都不是很了解,特别涉及到标本,所以想问问,动物酒精标本还能提到RNA吗?
  问题二:液氮研磨后,因为样品量比较小,所以组织冰冻粉末比较难刮到EP管中,所以想问是否可以直接把Trizol加在研钵中。
  试验条件:通风厨,全程手套口罩,酒精随时擦手套,EP管是进口已经灭菌密封包装那种,开过后又灭了2次菌。,DEPC水是分装好到1.5mlEP管中的,每次都拿新的~~~~
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-21 13:27:18
有个问题...什么叫酒精标本?
我们都知道RNA是很容易降解的,液氮保存当然最好,如果条件不够的话,-80℃冰箱也是可以的。
另外,若不能及时提取,最好在样本里加一些RNAlater,商品化的RNA保护剂,很多地方都有卖,这样可以有效防止RNA降解。
2楼2010-10-21 13:20:48
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)

是这样的,因为我们是在野外采集的标本,采集的时候是用75%的酒精泡~~
3楼2010-10-21 13:23:44
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)

因为采集的人是不做分子的,做的是物种鉴定
4楼2010-10-21 13:24:14
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那这个样本恐怕很难做下去了......
酒精浸泡不能抑制RNA降解,如果是常温存放的话那就更没希望~
5楼2010-10-21 13:32:00
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)

这样啊
唉,那比较杯具了~~
谢谢啊
那活体研磨,我能把Trizol 直接倒研钵里面吗,再吸进EP管?
还有就是,有的RNA提出来褐色的~(主要那些组织有颜色的~)
6楼2010-10-21 13:36:58
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

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dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-10-21 14:43:08
......TRIzol直接倒进研钵里~~~呃,这个我没试过,大概没问题吧。不知道研钵那么低温度会不会把TRIzol冻住。
RNA有颜色这个以前我们也遇到过,如果对RNA质量要求比较高的话,推荐用试剂盒提,效果会好很多,如果只是做做RT,qPCR之类的,那就无所谓。
7楼2010-10-21 14:34:51
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)

嗯,今天试的的确会冻住。因为考虑Trizol的作用, 所以后面相当于在研磨Trizol的冰(质地像软沙冰),等化的差不多了就转到管子里了。
主要是做RT的。
近2次,降解比较严重。没找到原因
8楼2010-10-21 17:29:41
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xiaoguang711

木虫 (正式写手)

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-08 11:43:23
要想做昆虫的RNA除非是活体或者是活体用液氮冷却后零下70保存!

或者是用Trizol保存组织可以零度或者4度短时间内保存,其它条件下很难得到完整的总RNA!

用酒精保存那是用来做昆虫种类鉴定的DNA序列的工作用的,RNA早已化为片段了
9楼2013-07-08 11:29:08
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