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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教昆虫酒精标本RNA提取
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】请教昆虫酒精标本RNA提取 已有3人参与

最近在用Trizol法抽提白蚁的总RNA。第一次用的活体液氮研磨的，比较正常。
  问题一：第二次用的酒精标本，普通凝胶电泳检测的时候条带都集中在200bp左右，就是都降解了。第三次酒精的还是降解了，而且RNA很少。因为以前一直是做细胞的，组织这块都不是很了解，特别涉及到标本，所以想问问，动物酒精标本还能提到RNA吗？
  问题二：液氮研磨后，因为样品量比较小，所以组织冰冻粉末比较难刮到EP管中，所以想问是否可以直接把Trizol加在研钵中。
  试验条件：通风厨，全程手套口罩，酒精随时擦手套，EP管是进口已经灭菌密封包装那种，开过后又灭了2次菌。，DEPC水是分装好到1.5mlEP管中的，每次都拿新的~~~~
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1楼 2010-10-21 13:15:09
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-10-21 13:27:18
有个问题...什么叫酒精标本？
我们都知道RNA是很容易降解的，液氮保存当然最好，如果条件不够的话，-80℃冰箱也是可以的。
另外，若不能及时提取，最好在样本里加一些RNAlater，商品化的RNA保护剂，很多地方都有卖，这样可以有效防止RNA降解。
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2楼2010-10-21 13:20:48
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)
是这样的，因为我们是在野外采集的标本，采集的时候是用75%的酒精泡~~
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3楼2010-10-21 13:23:44
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)
因为采集的人是不做分子的，做的是物种鉴定
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4楼2010-10-21 13:24:14
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
那这个样本恐怕很难做下去了......
酒精浸泡不能抑制RNA降解，如果是常温存放的话那就更没希望~
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5楼2010-10-21 13:32:00
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)
这样啊
唉，那比较杯具了~~
谢谢啊
那活体研磨，我能把Trizol 直接倒研钵里面吗，再吸进EP管？
还有就是，有的RNA提出来褐色的~（主要那些组织有颜色的~）
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6楼2010-10-21 13:36:58
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):热心鼓励。 2010-10-21 14:43:08
......TRIzol直接倒进研钵里~~~呃，这个我没试过，大概没问题吧。不知道研钵那么低温度会不会把TRIzol冻住。
RNA有颜色这个以前我们也遇到过，如果对RNA质量要求比较高的话，推荐用试剂盒提，效果会好很多，如果只是做做RT，qPCR之类的，那就无所谓。
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7楼2010-10-21 14:34:51
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zwenh1984

新虫 (初入文坛)
嗯，今天试的的确会冻住。因为考虑Trizol的作用， 所以后面相当于在研磨Trizol的冰（质地像软沙冰），等化的差不多了就转到管子里了。
主要是做RT的。
近2次，降解比较严重。没找到原因
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8楼2010-10-21 17:29:41
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xiaoguang711

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-08 11:43:23
要想做昆虫的RNA除非是活体或者是活体用液氮冷却后零下70保存！

或者是用Trizol保存组织可以零度或者4度短时间内保存，其它条件下很难得到完整的总RNA！

用酒精保存那是用来做昆虫种类鉴定的DNA序列的工作用的，RNA早已化为片段了
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9楼2013-07-08 11:29:08
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