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zzq770204至尊木虫 (著名写手)
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【求助/交流】求助：那种方法提取RNA浓度比较高？ 已有13人参与
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本人拟构建个均一化cDNA文库，需要的RNA量比较多，因此需要比较高的浓度。采用安比奥的试剂盒提取出的RNA浓度太低了，在逆转录和扩增时间的PCR次数太多了，难以满足要求。但是看别人用TRzol抽提由于时间长，很容易降解。请问哪种方法或试剂盒比较好？麻烦指点下，谢谢！ [ Last edited by zzq770204 on 2010-7-29 at 21:18 ] |
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2楼2010-07-21 11:43:11
won7
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winscavin
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zzq770204(金币+10):你是试剂公司还是？ 2010-07-24 20:17:18
zzq770204(金币+10): 2010-07-30 12:54:51
lstt09nk(金币+2):鼓励交流~~ 2010-08-02 17:18:22
zzq770204(金币+10):你是试剂公司还是？ 2010-07-24 20:17:18
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lstt09nk(金币+2):鼓励交流~~ 2010-08-02 17:18:22
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首先不明白你扩增目的基因后为什么要纯化？扩完了可以直接电泳。 如果反转录可以扩增ACTIN，说明模板质量还行，但是没看到你的RNA，也不知道你的材料来源，因此无法确定能否满足建库的要求。 我给你几个建议，如果你的CDNA模板量足够大，可以选择1-2lu跑个电泳看看。如果看到清晰弥散条带，那就是扩增环节的问题，跟你的模板无关了。 试试看用其他模板是否可以扩增？修改一下你的PCR条件，特别是退火温度。 找公司做文库，犯不上，现在这个已经很普及了，如果实验室有钱可以选择，毕竟省事，我们这边5K-2w不等，看你要多大的文库了。 |
7楼2010-07-24 15:37:38
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8楼2010-07-25 20:52:30
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reasonspare(金币+2):你的诚恳的帖子，值得我诚恳的加分。 2010-07-31 05:12:39
zzq770204(金币+10): 2010-07-31 22:48:04
reasonspare(金币+2):你的诚恳的帖子，值得我诚恳的加分。 2010-07-31 05:12:39
zzq770204(金币+10): 2010-07-31 22:48:04
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呵呵，先谢谢你的金币，这个帖子，无需金币，我也可以回答你。对于提大量RNA,目前已知的就是TRIZOL了，这个方法用的最广，最经典，至于你说的时间长降解，只要你按步骤完成，降解一点没关系的。你是要抽提什么材料的RNA？不同材料，提取差异化很大，有些组织容易提，有些植物的就很难提，包括材料的复杂程度，是否多糖，多沉淀，等等，都是考虑的因素。但是总体而言，TRIZOL是最好的方法了。可是多试几次，掌握方法就可以。不难的 |
9楼2010-07-31 02:50:01
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