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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】求助 ：急切！！
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zhengyadi

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助 ：急切！！ 已有11人参与

求助：新测得物种的某一基因序列，测序结果出现很多重叠峰，请问各位师兄师姐是什么原因。自己是第一次做。谢谢！
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1楼 2010-10-15 18:26:00
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zanghecang

木虫 (正式写手)

清晴
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呵呵！不懂
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实实在在做人，踏踏实实做事。
2楼2010-10-15 19:13:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR产物直接测还是装到质粒上面测的？
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3楼2010-10-15 19:26:20
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
达到反应的极限后就会出杂峰啊，可以多测一个反应。
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4楼2010-10-15 19:55:42
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virus2009

金虫 (正式写手)

人称 龙哥
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-10-15 23:14:43
如果是PCR产物的话应该是PCR有非特异 性扩增，如果是克隆的话，有可能是你的菌被污染，或者是非单克隆！
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virus
5楼2010-10-15 19:59:51
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zhengyadi

金虫 (小有名气)
目的基因是用质粒测序的，目的片段是700bp，扩增产物电泳鉴定也表明是700bp，结果测序的封很乱，多条峰杂在一起。很是不解???
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6楼2010-10-15 20:17:36
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wangrg5

铁杆木虫 (小有名气)

普通GG
★
看天(金币+1):热心 2010-10-15 23:14:55
网上找的，共同学习！


问题1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序结果移码）
解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序。
问题2（PCR 产物不纯，含部分序列一致的两种以上的片段，长度不一）
解决方法：主要原因是PCR 产物没有纯化，含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段，将PCR 产物进行PAGE 纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序，便可解决。
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自信勇敢坚强执着
7楼2010-10-15 20:23:52
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阿娇

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很可能是提的质粒非单克隆
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8楼2010-10-15 20:59:35
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ankang0910

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励新人交流 2010-10-15 23:15:10
没错，就是非单克隆！！
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实验顺利！！
9楼2010-10-15 21:05:24
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zhengyadi

金虫 (小有名气)
是用菌液做穿刺管测序的，什么是非单克隆？
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10楼2010-10-15 21:59:17
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