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zhengyadi

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助 :急切!!已有11人参与

求助:新测得物种的某一基因序列,测序结果出现很多重叠峰,请问各位师兄师姐是什么原因。自己是第一次做。谢谢!
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zanghecang

木虫 (正式写手)

清晴


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵!不懂
实实在在做人,踏踏实实做事。
2楼2010-10-15 19:13:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR产物直接测还是装到质粒上面测的?
3楼2010-10-15 19:26:20
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
达到反应的极限后就会出杂峰啊,可以多测一个反应。
4楼2010-10-15 19:55:42
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virus2009

金虫 (正式写手)

人称 龙哥

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-10-15 23:14:43
如果是PCR产物的话应该是PCR有非特异 性扩增,如果是克隆的话,有可能是你的菌被污染,或者是非单克隆!
virus
5楼2010-10-15 19:59:51
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zhengyadi

金虫 (小有名气)

目的基因是用质粒测序的,目的片段是700bp,扩增产物电泳鉴定也表明是700bp,结果测序的封很乱,多条峰杂在一起。很是不解???
6楼2010-10-15 20:17:36
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wangrg5

铁杆木虫 (小有名气)

普通GG


看天(金币+1):热心 2010-10-15 23:14:55
网上找的,共同学习!


问题1(模板中有碱基缺失,往往是单一位点(1-1)或两个位点(1-2)碱基缺失导致测序结果移码)
解决方法:将PCR 产物克隆到质粒(如T 载体)中挑单克隆测序,或将PCR 产物进行PAGE纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序。
问题2(PCR 产物不纯,含部分序列一致的两种以上的片段,长度不一)
解决方法:主要原因是PCR 产物没有纯化,含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段,将PCR 产物进行PAGE 纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序,便可解决。
自信勇敢坚强执着
7楼2010-10-15 20:23:52
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阿娇

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很可能是提的质粒非单克隆
8楼2010-10-15 20:59:35
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ankang0910

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励新人交流 2010-10-15 23:15:10
没错,就是非单克隆!!
实验顺利!!
9楼2010-10-15 21:05:24
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zhengyadi

金虫 (小有名气)

是用菌液做穿刺管测序的,什么是非单克隆?
10楼2010-10-15 21:59:17
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