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| 求助：新测得物种的某一基因序列，测序结果出现很多重叠峰，请问各位师兄师姐是什么原因。自己是第一次做。谢谢！ |
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wangrg5
铁杆木虫 (小有名气)
普通GG
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 虫号: 621973
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- 性别: GG
- 专业: 环境化学
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看天(金币+1):热心 2010-10-15 23:14:55
看天(金币+1):热心 2010-10-15 23:14:55
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网上找的，共同学习！ 问题1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序结果移码） 解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序。 问题2（PCR 产物不纯，含部分序列一致的两种以上的片段，长度不一） 解决方法：主要原因是PCR 产物没有纯化，含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段，将PCR 产物进行PAGE 纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序，便可解决。 |
7楼2010-10-15 20:23:52