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zzq770204

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助:那种方法提取RNA浓度比较高? 已有13人参与

本人拟构建个均一化cDNA文库,需要的RNA量比较多,因此需要比较高的浓度。采用安比奥的试剂盒提取出的RNA浓度太低了,在逆转录和扩增时间的PCR次数太多了,难以满足要求。但是看别人用TRzol抽提由于时间长,很容易降解。请问哪种方法或试剂盒比较好?麻烦指点下,谢谢!

[ Last edited by zzq770204 on 2010-7-29 at 21:18 ]
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won7

金虫 (小有名气)

zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:35
“扩增后纯化”是什么意思?是actin扩增后纯化吗?如果是的话,那多半是你的纯化试剂或步骤有问题。clontech构建未剪切文库让公司帮忙,3万元基本可以搞定。
3楼2010-07-21 11:43:53
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zhangzhuang

银虫 (初入文坛)

zzq770204(金币+6): 2010-07-22 14:36:50
你的引物,还有扩增条件的优化
2楼2010-07-21 11:43:11
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sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4):鼓励交流! 2010-07-21 18:08:00
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:11
不见得是RNA的问题,RNA只要降解不是很厉害,就能满足普通的反转录,扩个Actin还是没有问题的。但是如果要建库,就要保证RNA的质量和反转录的质量。
你们实验室不缺钱的话,还是交给公司吧。也就两三万,自己做很费劲,质量也很难保证。
4楼2010-07-21 14:57:54
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-22 12:14:14
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:03
clontech的这个试剂盒没用过。
能否具体描述一下呢?
(1)total RNA应该电泳检测的,如果再纯化mRNA的话,也应该电泳及分光光度法检测,RNA总量有多少,以及质量好坏应该能判断吧。
(2)对逆转录的产物进行扩增,用的是通用引物吗?采用纯化试剂盒纯化,然后割胶回收吗?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
5楼2010-07-22 12:02:00
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