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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：SDS-PAGE垂直电泳
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1jane1

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助：SDS-PAGE垂直电泳 已有3人参与

在做蛋白垂直电泳时，为什么跑到分离胶的中部时就跑不下去了，而且会出现一条非常细的蓝色条带？好像大家都能跑到胶的底部。分离胶我用的100v的恒压，跑了5个多小时也不行。
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1楼 2010-07-20 15:39:18
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
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跑不下去了？
你先检查一下分离胶是不是有点问题和你的内外buffer的用量
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2楼2010-07-20 15:59:35
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1jane1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-07-20 15:59:35:
跑不下去了？
你先检查一下分离胶是不是有点问题和你的内外buffer的用量

我用的是上样缓冲液，没有用buffer。0.1mol/L 的Tris-Hcl（PH 8.0），含1%的SDS，0.01mol/L 2-巯基乙醇，0.1g/L溴酚蓝，150g/L蔗糖，5mol/L脲，PH8.0。
分离胶是12%的
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3楼2010-07-20 16:08:27
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 1jane1 at 2010-07-20 16:08:27:


我用的是上样缓冲液，没有用buffer。0.1mol/L 的Tris-Hcl（PH 8.0），含1%的SDS，0.01mol/L 2-巯基乙醇，0.1g/L溴酚蓝，150g/L蔗糖，5mol/L脲，PH8.0。
分离胶是12%的

你的跑胶不用buffer，那是怎么跑的？？
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4楼2010-07-20 16:12:44
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
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应该注意几个方面的问题：
1、你在电泳时的电流时多少，如果电流偏小，你电泳多长时间都没有用，此时考虑是否内外是否相通，导致无电流。
2、你的蛋白的分子量多大，是否合适用12%的分离胶
3、胶凝固的是否均匀，由于部分区域胶浓度过大导致蛋白无法穿过
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5楼2010-07-20 16:50:57
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