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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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1jane1

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助:SDS-PAGE垂直电泳 已有3人参与

在做蛋白垂直电泳时,为什么跑到分离胶的中部时就跑不下去了,而且会出现一条非常细的蓝色条带?好像大家都能跑到胶的底部。分离胶我用的100v的恒压,跑了5个多小时也不行。
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
跑不下去了?
你先检查一下分离胶是不是有点问题和你的内外buffer的用量
2楼2010-07-20 15:59:35
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1jane1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-07-20 15:59:35:
跑不下去了?
你先检查一下分离胶是不是有点问题和你的内外buffer的用量

我用的是上样缓冲液,没有用buffer。0.1mol/L 的Tris-Hcl(PH 8.0),含1%的SDS,0.01mol/L 2-巯基乙醇,0.1g/L溴酚蓝,150g/L蔗糖,5mol/L脲,PH8.0。
分离胶是12%的
3楼2010-07-20 16:08:27
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 1jane1 at 2010-07-20 16:08:27:


我用的是上样缓冲液,没有用buffer。0.1mol/L 的Tris-Hcl(PH 8.0),含1%的SDS,0.01mol/L 2-巯基乙醇,0.1g/L溴酚蓝,150g/L蔗糖,5mol/L脲,PH8.0。
分离胶是12%的

你的跑胶不用buffer,那是怎么跑的??
4楼2010-07-20 16:12:44
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zemin_fang

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该注意几个方面的问题:
1、你在电泳时的电流时多少,如果电流偏小,你电泳多长时间都没有用,此时考虑是否内外是否相通,导致无电流。
2、你的蛋白的分子量多大,是否合适用12%的分离胶
3、胶凝固的是否均匀,由于部分区域胶浓度过大导致蛋白无法穿过
5楼2010-07-20 16:50:57
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