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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：那种方法提取RNA浓度比较高？
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zzq770204

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助：那种方法提取RNA浓度比较高？ 已有13人参与

本人拟构建个均一化cDNA文库，需要的RNA量比较多，因此需要比较高的浓度。采用安比奥的试剂盒提取出的RNA浓度太低了，在逆转录和扩增时间的PCR次数太多了，难以满足要求。但是看别人用TRzol抽提由于时间长，很容易降解。请问哪种方法或试剂盒比较好？麻烦指点下，谢谢！

[ Last edited by zzq770204 on 2010-7-29 at 21:18 ]
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1楼 2010-07-21 10:46:04
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
看天(金币+1):鼓励交流 2010-07-22 12:14:14
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:03
clontech的这个试剂盒没用过。
能否具体描述一下呢？
（1）total RNA应该电泳检测的，如果再纯化mRNA的话，也应该电泳及分光光度法检测，RNA总量有多少，以及质量好坏应该能判断吧。
（2）对逆转录的产物进行扩增，用的是通用引物吗？采用纯化试剂盒纯化，然后割胶回收吗？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
5楼2010-07-22 12:02:00
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zhangzhuang

银虫 (初入文坛)
zzq770204(金币+6): 2010-07-22 14:36:50
你的引物，还有扩增条件的优化
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2楼2010-07-21 11:43:11
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won7

金虫 (小有名气)
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:35
“扩增后纯化”是什么意思？是actin扩增后纯化吗？如果是的话，那多半是你的纯化试剂或步骤有问题。clontech构建未剪切文库让公司帮忙，3万元基本可以搞定。
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3楼2010-07-21 11:43:53
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+4):鼓励交流！ 2010-07-21 18:08:00
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:11
不见得是RNA的问题，RNA只要降解不是很厉害，就能满足普通的反转录，扩个Actin还是没有问题的。但是如果要建库，就要保证RNA的质量和反转录的质量。
你们实验室不缺钱的话，还是交给公司吧。也就两三万，自己做很费劲，质量也很难保证。
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4楼2010-07-21 14:57:54
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