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zzq770204

至尊木虫 (著名写手)

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专业: 作物分子育种

[交流] 【求助/交流】求助：那种方法提取RNA浓度比较高？已有13人参与

本人拟构建个均一化cDNA文库，需要的RNA量比较多，因此需要比较高的浓度。采用安比奥的试剂盒提取出的RNA浓度太低了，在逆转录和扩增时间的PCR次数太多了，难以满足要求。但是看别人用TRzol抽提由于时间长，很容易降解。请问哪种方法或试剂盒比较好？麻烦指点下，谢谢！

[ Last edited by zzq770204 on 2010-7-29 at 21:18 ]

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1楼 2010-07-21 10:46:04

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super1998

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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性别: GG
专业: 植物病理学

★ ★
zzq770204(金币+10):你是试剂公司还是？ 2010-07-24 20:17:18
zzq770204(金币+10): 2010-07-30 12:54:51
lstt09nk(金币+2):鼓励交流~~ 2010-08-02 17:18:22

首先不明白你扩增目的基因后为什么要纯化？扩完了可以直接电泳。
如果反转录可以扩增ACTIN，说明模板质量还行，但是没看到你的RNA，也不知道你的材料来源，因此无法确定能否满足建库的要求。
我给你几个建议，如果你的CDNA模板量足够大，可以选择1-2lu跑个电泳看看。如果看到清晰弥散条带，那就是扩增环节的问题，跟你的模板无关了。
试试看用其他模板是否可以扩增？修改一下你的PCR条件，特别是退火温度。
找公司做文库，犯不上，现在这个已经很普及了，如果实验室有钱可以选择，毕竟省事，我们这边5K-2w不等，看你要多大的文库了。