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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：那种方法提取RNA浓度比较高？
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zzq770204

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助：那种方法提取RNA浓度比较高？ 已有13人参与

本人拟构建个均一化cDNA文库，需要的RNA量比较多，因此需要比较高的浓度。采用安比奥的试剂盒提取出的RNA浓度太低了，在逆转录和扩增时间的PCR次数太多了，难以满足要求。但是看别人用TRzol抽提由于时间长，很容易降解。请问哪种方法或试剂盒比较好？麻烦指点下，谢谢！

[ Last edited by zzq770204 on 2010-7-29 at 21:18 ]
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1楼 2010-07-21 10:46:04
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super1998

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by super1998 at 2010-07-24 15:37:38:
首先不明白你扩增目的基因后为什么要纯化？扩完了可以直接电泳。
如果反转录可以扩增ACTIN，说明模板质量还行，但是没看到你的RNA，也不知道你的材料来源，因此无法确定能否满足建库的要求。
我给你几个建议，如 ...

我是学生，呵呵，我得意思是我们学校这边，公司是这个价格。
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123
8楼2010-07-25 20:52:30
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zhangzhuang

银虫 (初入文坛)
zzq770204(金币+6): 2010-07-22 14:36:50
你的引物，还有扩增条件的优化
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2楼2010-07-21 11:43:11
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won7

金虫 (小有名气)
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:35
“扩增后纯化”是什么意思？是actin扩增后纯化吗？如果是的话，那多半是你的纯化试剂或步骤有问题。clontech构建未剪切文库让公司帮忙，3万元基本可以搞定。
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3楼2010-07-21 11:43:53
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+4):鼓励交流！ 2010-07-21 18:08:00
zzq770204(金币+10): 2010-07-22 14:36:11
不见得是RNA的问题，RNA只要降解不是很厉害，就能满足普通的反转录，扩个Actin还是没有问题的。但是如果要建库，就要保证RNA的质量和反转录的质量。
你们实验室不缺钱的话，还是交给公司吧。也就两三万，自己做很费劲，质量也很难保证。
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4楼2010-07-21 14:57:54
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