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安安90

木虫 (小有名气)

[求助] 求助：RNA提取

求助：今天提取的RNA260/280在1.95-2.05之内，但是260/230有的1.2-1.4，也有的是1.9-2.2，接下来要进行反转录做相对荧光定量，这可以用吗？O(∩_∩)O谢谢
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我的未来不是梦！
1楼 2013-11-12 20:45:59
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xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-13 12:39:52
不确定楼主提取的是总RNA还是什么，但是以定量PCR而论，我记得我们组之前都不大看OD的，因为如果提出来质量不好的RNA 测OD也有可能正常。一般需要跑个电泳，用聚丙烯酰胺胶（分辨率比较高，琼脂糖应该也可以吧），只要分离相，TBE制胶TBE缓冲，上样孔看看蛋白多不多，RNA完整不完整（这个最重要），有没有分解的现象。好的RNA一般是一条连续的亮带，根据物种不同，核糖体RNA有一个亮度比例，一般电泳跑出来条带不正常的做实验常常会得到错误的结果。这个很久没做了，细节都忘光光了，不过应该可以查得到，希望有帮助。
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2楼2013-11-13 02:33:03
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zuoqi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:20:10
重点看28s和18s两条带的亮度是否为2：1，符合了这个比例，而且5s很少就可以了。
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3楼2013-11-13 06:16:09
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安安90

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xipha at 2013-11-13 02:33:03
不确定楼主提取的是总RNA还是什么，但是以定量PCR而论，我记得我们组之前都不大看OD的，因为如果提出来质量不好的RNA 测OD也有可能正常。一般需要跑个电泳，用聚丙烯酰胺胶（分辨率比较高，琼脂糖应该也可以吧），只 ...

提的是总RNA
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我的未来不是梦！
4楼2013-11-13 10:56:11
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安安90

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zuoqi at 2013-11-13 06:16:09
重点看28s和18s两条带的亮度是否为2：1，符合了这个比例，而且5s很少就可以了。

琼脂糖凝胶电泳图不太好
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我的未来不是梦！
5楼2013-11-13 10:56:49
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N323

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:20:21
肯定会影响扩增效率，最好纯化一下！我之前做荧光定量提起RNA时，左后用RNAase free wanter 溶解。不用试剂盒里。只是建议！
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学无止境
6楼2013-11-13 13:45:32
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安安90

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by N323 at 2013-11-13 13:45:32
肯定会影响扩增效率，最好纯化一下！我之前做荧光定量提起RNA时，左后用RNAase free wanter 溶解。不用试剂盒里。只是建议！

怎么纯化啊?具体怎么做啊?
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我的未来不是梦！
7楼2013-11-13 14:17:59
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:20:34
你提取的RNA260/280在1.95-2.05之间是比较好的，其它参数不太重要。RNA提完一定要跑电泳看看，如果18S\28S或者23S\16S条带清晰并较好分开，就可以顺利进行逆转录实验。
祝你实验成功。
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转向地质微生物学
8楼2013-11-14 19:52:37
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