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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA 提取 OD 260/230 值偏低
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zzjj_207

金虫 (小有名气)

[求助] RNA 提取 OD 260/230 值偏低

最近在用Bioline的试剂盒提取植物幼苗（包括根）的RNA。 提取的RNA的条带还可以（见附图），OD260/280都大于2.0， 但是OD260/230却小于1.8，有的甚至0.5~0.6，点样空附近可以看到一条模糊的带，是不是糖和盐类物质？怎么采取补救措施去除？求高手指点？
RNA 提取 OD 260/230 值偏低
图片4.jpg
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zzjj_207

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1楼 2013-07-11 09:52:28
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回帖置顶 ( 共有1个 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
kx444555: 金币+2, 热心的版主 2013-07-11 14:44:11
amisking: 回帖置顶 2013-07-11 18:25:25
我也遇到过这种情况。260/230偏低可能是提取试剂的残留，或者乙醇没挥发干净，我碰到的是后者。当时解决的方法也就是尽量去除乙醇了。异丙醇沉淀RNA之后，加75%乙醇洗，洗完用蓝枪头把乙醇吸走，再短暂离心，用白枪头将残余的乙醇尽量吸干，然后等乙醇充分挥发后再加水溶解RNA。挥发乙醇时注意观察RNA沉淀块，沉淀块由白色变成半透明时乙醇就挥发得差不多了，此时加水比较合适。据说挥发时间太长，RNA水分很少时再溶解会很困难，不过我没遇见过。
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4楼2013-07-11 12:39:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zzjj_207 at 2013-07-11 16:08:14
那个buffer的成分是有酒精的，我每次洗完最后一次离心完以后就加水溶解。有可能是酒精没挥发完，谢谢版主提醒，我下次提取的时候注意下，非常感谢。...

不客气哈~
突然想起用kit提质粒时，wash buffer洗完两次并离心之后，还有一步是空管子离心，进一步去除酒精（说明书上说这步很重要，少了这步酒精残留会比较多）。
你那kit原理跟提DNA的也差不多，你也可以试试在第三次加wash buffer洗了之后，离心，倒掉废液，然后再离心一次，再等酒精挥发几分钟，应该就能彻底去除酒精了。
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9楼2013-07-11 17:33:11
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zzjj_207: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-15 09:41:26
提示几点：
1.RNA通常用分光光度计定量，测量在260 nm处的吸收值（A260）。通常分光光度计A260的读数要介于0.15-1.0之间才是可靠的，因此RNA提取结束后，要根据大概产量稀释（推荐用10 mM Tris.HCl, pH 7.0稀释）到适当浓度范围，再用分光光度计测量。A260为1相当于RNA的浓度为40 µg/ml。
2.为了检测RNA的纯度，可以测量A260与A280的比值，通常纯RNA的A260/A280为1.9-2.1。
3.提取RNA时的用的所有玻璃制品都应该在240℃烘烤3-4小时。提取RNA时的用的所有旧塑料制品都必须用0.5M的NaOH处理10分钟，并用DEPC-H2O彻底冲洗后灭菌，也可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。无法用DEPC处理的用具可以用氯仿擦拭若干次，这样通常可以消除RNA酶的活性。
4.RNA样品一旦从生物体中分离后，细胞内的RNA就变得非常不稳定，容易降解。取样后最好用液氮速冻，再放到超低温冰箱中保存。
Good Luck！
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13楼2013-07-11 23:42:33
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 很详细 2013-07-11 12:18:49
zzjj_207: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-15 09:42:24
我觉得你提的RNA不错了，比较完整。A260/230比较低可能是试剂中一些成分的污染，A260/280可以说明蛋白污染不多。你点样孔的暗带是蛋白核酸复合体。不知道你的RNA要做什么用，一般这样的样品可以直接用的，不用特别纠结A260/230。
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2楼2013-07-11 11:30:45
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zzjj_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-11 11:30:45
我觉得你提的RNA不错了，比较完整。A260/230比较低可能是试剂中一些成分的污染，A260/280可以说明蛋白污染不多。你点样孔的暗带是蛋白核酸复合体。不知道你的RNA要做什么用，一般这样的样品可以直接用的，不用特别纠 ...

谢谢回复，我后边要做测序，要求A260/230大于1.8，我是用的Bioline的Kit 提取的，可不可以按照步骤提完以后，最后再用70%的酒精再洗一次呢？不知道能不能去除那些杂质？
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3楼2013-07-11 12:29:19
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zzjj_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-07-11 12:39:05
我也遇到过这种情况。260/230偏低可能是提取试剂的残留，或者乙醇没挥发干净，我碰到的是后者。当时解决的方法也就是尽量去除乙醇了。异丙醇沉淀RNA之后，加75%乙醇洗，洗完用蓝枪头把乙醇吸走，再短暂离心，用白枪 ...

谢谢版主，我用柱式的Kit 提的，按照试验步骤用试剂盒里的wash buffer 洗了三次，每次加了wash buffer都会短暂离心。最后RNA留在柱子的膜上，加水溶解。会不会是那个wash buffer 里的残留？ 我在想可不可以在加水溶解前再用乙醇洗一次，不知道会不会好些？新手上路，请多指教！
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5楼2013-07-11 13:24:17
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zzjj_207 at 2013-07-11 13:24:17
谢谢版主，我用柱式的Kit 提的，按照试验步骤用试剂盒里的wash buffer 洗了三次，每次加了wash buffer都会短暂离心。最后RNA留在柱子的膜上，加水溶解。会不会是那个wash buffer 里的残留？ 我在想可不可以在加水溶 ...

呵呵，原来是kit啊。
很多wash buffer其实是含酒精的，你闻闻看有没有酒精味。建议你用wash buffer洗了最后一次之后，开盖让酒精挥发个几分钟，然后再加水溶解，类似提质粒那样。
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zzjj_207
6楼2013-07-11 14:40:46
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zzjj_207

金虫 (小有名气)
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那个buffer的成分是有酒精的，我每次洗完最后一次离心完以后就加水溶解。有可能是酒精没挥发完，谢谢版主提醒，我下次提取的时候注意下，非常感谢。
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7楼2013-07-11 16:06:59
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zzjj_207

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-07-11 14:40:46
呵呵，原来是kit啊。
很多wash buffer其实是含酒精的，你闻闻看有没有酒精味。建议你用wash buffer洗了最后一次之后，开盖让酒精挥发个几分钟，然后再加水溶解，类似提质粒那样。...

那个buffer的成分是有酒精的，我每次洗完最后一次离心完以后就加水溶解。有可能是酒精没挥发完，谢谢版主提醒，我下次提取的时候注意下，非常感谢。
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8楼2013-07-11 16:08:14
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zzjj_207

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-07-11 17:33:11
不客气哈~
突然想起用kit提质粒时，wash buffer洗完两次并离心之后，还有一步是空管子离心，进一步去除酒精（说明书上说这步很重要，少了这步酒精残留会比较多）。
你那kit原理跟提DNA的也差不多，你也可以 ...

好的，我下次试试这样做
还有那我的胶孔附近的带是什么呢？不是DNA，因为我拍照后发现有带，我又放回去跑了10来分钟，还是没动，所以应该不是DNA，不知道是什么杂质？能不能去除？
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10楼2013-07-11 18:50:43
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