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【求助/交流】RNA抽提260/230比值很小 已有5人参与
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| 用Tirzol抽提组织总RNA，几次试验结果260/280比值和电泳图的结果都还不错，没有蛋白质和DNA的污染，但260/230比值都只在0.5左右，这是什么原因？？？？ |
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gaoyang636
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西瓜
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+8): 谢谢交流 2011-03-25 08:25:14
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dhd997(金币+8): 谢谢交流 2011-03-25 08:25:14
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前几天有人问过类似问题了。 260/230的值，一般不要小于2.0，小的话表明有异硫氰酸胍，β-巯基乙醇或乙醇的残留。补救的方法是再沉淀一次，然后重复乙醇洗涤的过程。但从我的经验看，后面RNA丢得很多……因此提RNA时就注意了 个人经验，260/230偏小的话，提取时可以改进以下几点： 1. 加氯仿抽提后取少一点上清，不要贪多。 2.加乙醇洗的时候，多晃几次，尽量让RNA沉淀整片悬浮起来（有时候确实浮不起来也没办法。） 3.弃乙醇的时候，用枪吸而不是倾倒，倒的话经常有液滴留在管壁上，倒不干净。第一次用蓝枪头吸，可以不完全吸干，免得吸到沉淀；然后短暂离心把残余酒精甩到管底，看准了用白枪头尽量吸干净。RNA量大，被白枪头弄掉一点也没关系。 4.溶解前晾干的时间可以长一点，5分钟也没关系的。标准的做法说是不能晾太久，等沉淀开始变透明就要加水溶解，但是我晾过10分钟的，后面RNA量也很大。可能量大，虽然有些溶解不了，最后浓度还是高。 可能不完全正确，但是以前我出现过260/230偏小的问题，按上面方法改进了操作，后面就好了。 还有一种原因可能是多糖类杂质残留，可试试用LiCl沉淀。 |
5楼2011-03-24 22:01:08
6楼2013-05-15 16:37:33
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