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wawa_wang

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物根系RNA提取,260/230过低怎么办?

植株是种在石英砂里面的,取了根系的样品打算测序,但是现在已经练习很久了,还不能提出合格的RNA,260/230总是过低,一般为1.6-1.7,是在想不出办法了,希望各位大侠伸出援手。
另外还有个问题,加入氯仿后是剧烈振荡好,还是上下颠倒混匀乳化就行?我之前提的RNA,加入氯仿后,上下颠倒混匀至不分层,然后就静止,这样做抽提第二遍就看不见蛋白层了,测OD值时,260/280的数值基本上都在1.9-2.1之间。今天我提RNA的时候,师兄说要剧烈振荡一分钟,我照做了,然后抽提了五次才看不见蛋白层。请问这是为什么呢?
另外附一张RNA的电泳图,请大家帮我看看,提得怎么样。非常感谢!
拜托拜托

111.JPG



111.JPG



[ Last edited by wawa_wang on 2012-11-14 at 22:43 ]
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做RNA一般都以电泳图为准,只要三条带都有,比例也对就可以了。分光光度计测往往存在仪器是否校准的问题,差的不是很大就不用太在意。从电泳图上看感觉大部分样品都提的不错,可以继续试验了。楼主要RNA做什么?
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-11-15 22:00:53
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wawa_wang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-11-15 22:00:53
我做RNA一般都以电泳图为准,只要三条带都有,比例也对就可以了。分光光度计测往往存在仪器是否校准的问题,差的不是很大就不用太在意。从电泳图上看感觉大部分样品都提的不错,可以继续试验了。楼主要RNA做什么?

打算测表达谱的,你帮忙看看电泳图有DNA污染吗?
3楼2012-11-15 23:09:04
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wawa_wang at 2012-11-15 23:09:04
打算测表达谱的,你帮忙看看电泳图有DNA污染吗?...

我感觉都还行
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
4楼2012-11-16 00:38:34
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光武故里

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从电泳情况看,提取的RNA总体质量还好,只是稍微有些DNA杂质(见28S条带上的条带);另外点样孔有些亮,疑是有蛋白杂质
5楼2012-11-17 12:40:47
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

剧烈震荡一分钟左右,然后200ul枪,分次抽提;
一手生存,一手梦想
6楼2013-02-28 10:06:21
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mazhq1988

金虫 (正式写手)

你这是用什么方法提取的呀?
爱人者,人恒爱之;敬人者,人恒敬之;助人者,人恒助之
7楼2013-09-21 13:36:53
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