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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 25ml瓶中提取细胞RNA ，1mlTrizol ，OD比值为1.8 电泳的时候却看不到任何条带？
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 25ml瓶中提取细胞RNA ，1mlTrizol ，OD比值为1.8 电泳的时候却看不到任何条带？

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1楼 2012-06-05 15:49:58
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longrna

新虫 (正式写手)
加异丙醇沉淀离心后是否有可见沉淀？
A260的具体读数是多少？产量如何？
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伟大航线....
2楼2012-06-05 16:23:39
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2012-06-05 16:23:39
加异丙醇沉淀离心后是否有可见沉淀？
A260的具体读数是多少？产量如何？

您好，加入异丙醇后看不到沉淀，A260为0.456，A280是0.249，上样的时候是加入了5ul和1ul loading buffer，电泳电压是190V，1.0%的琼脂糖凝胶，加入的Goldview为0.6ul。我想问一下，是不是细胞的量较少，RNA达不到检测量，或者是Goldview加的量太少了？
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3楼2012-06-05 18:17:41
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
西瓜: 金币+3, 很热心哈 2012-06-06 19:01:27
A260是用什么紫外分光光度计测的？读数是 ng/ul? 测前是否稀释？
电泳时marker是怎样？
因为不知是你没提出来还是电泳的问题。
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伟大航线....
4楼2012-06-06 17:04:34
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by longrna at 2012-06-06 17:04:34
A260是用什么紫外分光光度计测的？读数是 ng/ul? 测前是否稀释？
电泳时marker是怎样？
因为不知是你没提出来还是电泳的问题。

A260是Unico紫外分光光度计测的，稀释的倍数是20倍，用DEPC处理后水稀释，听一位师兄说要最好用酶标仪测，但是我们没有石英板，结果没法用。读数*20*40得出产量，单位是ug/ml。
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5楼2012-06-06 23:01:34
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 热心的虫虫 2012-06-07 13:49:37
用一个已知浓度且有跑电泳检测过没问题的RNA和你现在提的一起同时电泳。
一般小孔的胶上样100-200ng；大孔400-500ng。
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伟大航线....
6楼2012-06-07 08:24:01
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wansanlian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有测A230值吗?
有的时候A230值也很关键,
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乱花渐欲迷人眼
7楼2012-06-07 22:22:14
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-08 14:13:24
1.8不代表你提出来的是RNA，有可能降解了的RNA混合着其他物质也能让数值变成1.8。一般情况，rna提取出来以后，1ul的RNA就会很亮。
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8楼2012-06-08 00:54:52
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 我是小纯洁 at 2012-06-08 00:54:52
1.8不代表你提出来的是RNA，有可能降解了的RNA混合着其他物质也能让数值变成1.8。一般情况，rna提取出来以后，1ul的RNA就会很亮。

这我也表示同意，关键是电泳跑的不好，所以感觉比值是1.8也没有太大意义了
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9楼2012-06-08 13:32:08
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wansanlian at 2012-06-07 22:22:14
有测A230值吗?
有的时候A230值也很关键,

这个没有测，我用是PC12细胞提取的，不知道是不是细胞株的问题？？？
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10楼2012-06-08 13:32:51
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