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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 23Kb大小的基因组DNA完整性检测时琼脂糖电泳相关条件
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我是驴

金虫 (小有名气)

[求助] 23Kb大小的基因组DNA完整性检测时琼脂糖电泳相关条件

求教给位，23Kb大小的基因组DNA完整性检测时，琼脂糖胶浓度为多少最好，电压和跑胶时间多少最为适宜？请大家指点一下，谢谢各位了。
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努力向前
1楼 2012-05-19 12:12:25
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-19 18:16:47
0.8% 就可以，再低，胶就容易碎了；
低电压，我一般是用100-110v (电泳槽两级之间大约20cm长)
多跑一会儿，20-30min就能看了，看看不行，再跑十分钟再看……
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2楼2012-05-19 17:25:55
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xmuring

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-20 09:07:54
我跑过0.7%的胶，还可以，就是凝胶的时间比较长，操作的时候小心点就行了。跑低浓度的胶要把电压控制的低一点，哪怕时间加长点，不然胶会过热，跑得不均匀甚至会化掉，个人推荐80 V，用的是普通的六一的电泳槽。lz可以跑胶的时候看下loading buffer里溴酚蓝的进度来推测DNA的迁移距离，不同浓度的胶溴酚蓝相对于DNA的迁移距离也不一样，可以查到的
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3楼2012-05-19 22:01:20
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我是驴

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-19 17:25:55:
0.8% 就可以，再低，胶就容易碎了；
低电压，我一般是用100-110v (电泳槽两级之间大约20cm长)
多跑一会儿，20-30min就能看了，看看不行，再跑十分钟再看……

我跑过0.5%的，50V,1.5min跑出来的距离也不是很远，要是50V，跑4.5min胶上23Kb那条带又不是特别明显了。因为我要涉及低熔点琼脂糖胶纯化DNA，但是跑出来的DNA不是特别的合适，纯化后至少DNA用肉眼看不到。
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努力向前
4楼2012-05-19 23:45:10
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jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)
请问一下，你这个23kb大小的基因组DNA的来源是什么？大肠杆菌吗？还是别的？
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5楼2012-06-27 19:14:38
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dyh1978

木虫 (著名写手)
我试过0.4%胶，1XTAE，70V电压，1.5小时电泳，六一的电泳槽，但是效果不好，20kb及以上的大片段MARKER分不开。同问解决方法
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6楼2013-04-01 15:52:59
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