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我是驴

金虫 (小有名气)

[求助] 23Kb大小的基因组DNA完整性检测时琼脂糖电泳相关条件

求教给位,23Kb大小的基因组DNA完整性检测时,琼脂糖胶浓度为多少最好,电压和跑胶时间多少最为适宜?请大家指点一下,谢谢各位了。
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努力向前
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dyh1978

木虫 (著名写手)

我试过0.4%胶,1XTAE,70V电压,1.5小时电泳,六一的电泳槽,但是效果不好,20kb及以上的大片段MARKER分不开。同问解决方法
6楼2013-04-01 15:52:59
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-19 18:16:47
0.8% 就可以,再低,胶就容易碎了;
低电压,我一般是用100-110v (电泳槽两级之间大约20cm长)
多跑一会儿,20-30min就能看了,看看不行,再跑十分钟再看……
2楼2012-05-19 17:25:55
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xmuring

木虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-20 09:07:54
我跑过0.7%的胶,还可以,就是凝胶的时间比较长,操作的时候小心点就行了。跑低浓度的胶要把电压控制的低一点,哪怕时间加长点,不然胶会过热,跑得不均匀甚至会化掉,个人推荐80 V,用的是普通的六一的电泳槽。lz可以跑胶的时候看下loading buffer里溴酚蓝的进度来推测DNA的迁移距离,不同浓度的胶溴酚蓝相对于DNA的迁移距离也不一样,可以查到的
3楼2012-05-19 22:01:20
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我是驴

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-19 17:25:55:
0.8% 就可以,再低,胶就容易碎了;
低电压,我一般是用100-110v (电泳槽两级之间大约20cm长)
多跑一会儿,20-30min就能看了,看看不行,再跑十分钟再看……

我跑过0.5%的,50V,1.5min跑出来的距离也不是很远,要是50V,跑4.5min胶上23Kb那条带又不是特别明显了。因为我要涉及低熔点琼脂糖胶纯化DNA,但是跑出来的DNA不是特别的合适,纯化后至少DNA用肉眼看不到。
努力向前
4楼2012-05-19 23:45:10
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