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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮我看看这张电泳图中存在的问题
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menglinyan

新虫 (小有名气)

[求助] 帮我看看这张电泳图中存在的问题

我最近在做RAPD，半个月了，没有条带，几乎都是这样的。急死我了，谁能帮帮我啊！！！
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1楼2012-04-15 14:50:32
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menglinyan

新虫 (小有名气)
没人理我啊，，，刚才检测又是白板，我的模板浓度和引物浓度都降低了，还是跑不出来。RAPD有那么难做的吗！
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2楼2012-04-15 18:16:20
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by menglinyan at 2012-04-15 18:16:20:
没人理我啊，，，刚才检测又是白板，我的模板浓度和引物浓度都降低了，还是跑不出来。RAPD有那么难做的吗！

楼主 请问您的问题得到解决了吗  我最近也在做RAPD 也是跑胶好多次都跑不出来 电泳结果跟你的不一样 而是什么都没有 求交流啊
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3楼2012-05-16 20:38:55
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menglinyan

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wskxbxf at 2012-05-16 20:38:55:
楼主 请问您的问题得到解决了吗  我最近也在做RAPD 也是跑胶好多次都跑不出来 电泳结果跟你的不一样 而是什么都没有 求交流啊

我的已经出来了。最大的问题是，我们用的排管不干净。RAPD不稳定，随机性大，重复性差，所以很容易受污染。后来我换做了一次性的EP管子就出来了。效果还不错，每次都有带。。我先开始做的是15微升体系，后来发现点样的时候会蒸发一些。。你可以用30微升的体系先试试，MIX15，水13，DNA1，引物1。看看有没有带，这个体系比较稳定。。模板必须没有降解啊，如果这些因素都排除了，还是没有出条带，那你可以用其他材料的DNA试试，还不行的话，就是引物的问题了。
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4楼2012-05-17 09:40:32
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by menglinyan at 2012-05-17 09:40:32:
我的已经出来了。最大的问题是，我们用的排管不干净。RAPD不稳定，随机性大，重复性差，所以很容易受污染。后来我换做了一次性的EP管子就出来了。效果还不错，每次都有带。。我先开始做的是15微升体系，后来发现 ...

哦 我用的是0.5的EP管 没有混合mix 每个样都是自己加的 我的DNA加了大概70-80ng 引物我的浓度是10微摩尔每升的，我做的体系是25μ 我引物也是加了1μ DNA没问题 我跑带看过了 能不能请教一下 您的模板 引物 以及镁离子的终浓度 谢谢了 参考一下
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5楼2012-05-17 10:35:24
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wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by menglinyan at 2012-05-17 09:40:32:
我的已经出来了。最大的问题是，我们用的排管不干净。RAPD不稳定，随机性大，重复性差，所以很容易受污染。后来我换做了一次性的EP管子就出来了。效果还不错，每次都有带。。我先开始做的是15微升体系，后来发现 ...

还有一个就是 我的镁离子是直接在buffer里的 可能是不是镁离子的浓度比较低的原因 谢谢了 想参考一下您的
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6楼2012-05-17 10:38:19
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sunyan1129

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也要做RAPD，是25ul体系的，但是跑出来的带有点弥散掉了，只要一个有很清楚地带…… 想交流一下，谢谢
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还是在原地……fighting！！！！
7楼2012-05-17 16:57:26
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虹雨1

新虫 (小有名气)
我做的是拟南芥的，用的20ul的体系，10ul mix，8ul水，1ul引物，1ulDNA，没有条带，我是用的一次性ep管

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8楼2022-10-10 11:19:22
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