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lixiaoling13铜虫 (正式写手)
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[求助]
哪位高手来帮我看看我这个失败的电泳图啊
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提取的总DNA 做了好几次 就是不出marker。 电压25v 跑了1h ，第一个孔是marker 而且 其它条带也不亮啊 为什么啊为为什么？ 胶的问题吗？还是缓冲液ph值的问题啊？肯定不是marker本身的问题 因为别人用这个marker就出。EB也没问题。 100v 20min也试过 不出 90v 20分钟 也不出  |
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shrimp5555
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【答案】应助回帖
lixiaoling13(金币+1): 答非所问啊 都说是总DNA了 还没有扩增呢 2011-10-17 16:44:38
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1.1 反应循环数不够：一般都要在 35 个循环以上，可根据实验情况增加循环，但高于45个循环会增加过多的背景信号。 1.2 检测荧光信号的步骤有误：一般采用 72℃延伸时采集荧光，Taqman 方法则一般在退火结束或延伸结束采集信号。 1.3 引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性。 1.4 探针设计不佳：设计探针温度低于引物，造成探针未杂交上而产物已延伸。 1.5 模板量少：对未知浓度的样品应从系列稀释样品的最高浓度做起。 1.6 模板降解：避免样品制备中杂质的引入以及模板反复冻融的情况发生。 |
2楼2011-10-17 16:17:18
3楼2011-10-17 17:32:12
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kristine2011
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