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lixiaoling13

铜虫 (正式写手)

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[求助] 哪位高手来帮我看看我这个失败的电泳图啊

提取的总DNA
做了好几次就是不出marker。
电压25v 跑了1h ，第一个孔是marker
而且其它条带也不亮啊
为什么啊为为什么？
胶的问题吗？还是缓冲液ph值的问题啊？肯定不是marker本身的问题因为别人用这个marker就出。EB也没问题。
100v 20min也试过不出
90v 20分钟也不出

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生命，静静的流淌吧

1楼2011-10-17 12:18:52

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shrimp5555

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

lixiaoling13(金币+1): 答非所问啊都说是总DNA了还没有扩增呢 2011-10-17 16:44:38

1.1  反应循环数不够：一般都要在 35 个循环以上，可根据实验情况增加循环，但高于45个循环会增加过多的背景信号。
1.2  检测荧光信号的步骤有误：一般采用 72℃延伸时采集荧光，Taqman 方法则一般在退火结束或延伸结束采集信号。
1.3  引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性。
1.4  探针设计不佳：设计探针温度低于引物，造成探针未杂交上而产物已延伸。
1.5  模板量少：对未知浓度的样品应从系列稀释样品的最高浓度做起。
1.6  模板降解：避免样品制备中杂质的引入以及模板反复冻融的情况发生。