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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 哪位高手来帮我看看我这个失败的电泳图啊
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lixiaoling13

铜虫 (正式写手)

[求助] 哪位高手来帮我看看我这个失败的电泳图啊

提取的总DNA
做了好几次 就是不出marker。
电压25v 跑了1h ，第一个孔是marker
而且 其它条带也不亮啊
为什么啊为为什么？
胶的问题吗？还是缓冲液ph值的问题啊？肯定不是marker本身的问题 因为别人用这个marker就出。EB也没问题。
100v 20min也试过 不出
90v 20分钟 也不出
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生命，静静的流淌吧
1楼 2011-10-17 12:18:52
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shrimp5555

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lixiaoling13(金币+1): 答非所问啊 都说是总DNA了 还没有扩增呢 2011-10-17 16:44:38
1.1  反应循环数不够：一般都要在 35 个循环以上，可根据实验情况增加循环，但高于45个循环会增加过多的背景信号。
1.2  检测荧光信号的步骤有误：一般采用 72℃延伸时采集荧光，Taqman 方法则一般在退火结束或延伸结束采集信号。
1.3  引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性。
1.4  探针设计不佳：设计探针温度低于引物，造成探针未杂交上而产物已延伸。
1.5  模板量少：对未知浓度的样品应从系列稀释样品的最高浓度做起。
1.6  模板降解：避免样品制备中杂质的引入以及模板反复冻融的情况发生。
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大大傻气加上少少耍流氓
2楼2011-10-17 16:17:18
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

MAKER都没出？是不是点样问题。点样时跑出去了还是？
还有就是染色时间问题。是不是时间短了.
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3楼2011-10-17 17:32:12
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ybs007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你按分子克隆上把TAE 重新配一下吧，我以前见过玩命跑不出Marker的，换的TAE就好了。你可以试试。
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平生我自知
4楼2011-10-17 17:49:52
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fisheart

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助回帖 2011-10-18 18:37:19
marker没问题，EB没问题的意思是？ 和别人同用一管marker同一管EB? 用一样多量？先排除试剂本身问题，排除上样量过少的问题，再考虑其他
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5楼2011-10-17 19:44:35
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kristine2011

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖 2011-10-18 18:37:04
1. 胶正负极没跑反吧，不过根据其他孔的隐约条带，应该是没放反。
2. 染色时间建议延长，基因组条带也不亮啊。
3. 建议换别人的，或别的实验室的Marker试试。
4. 上样量是多少啊。
5. 确定胶没漏掉吧，拔梳子时候还是要注意的。
导致这个的原因还是蛮多的。
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6楼2011-10-18 09:30:10
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eileen8519

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

会不会是胶没有制好呢，你用的多大浓度的胶？
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7楼2011-10-18 10:34:16
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小婧子zj

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
lixiaoling13(金币+4): 可能吧...电泳液自己配的 木有ph仪 用的试纸 悲剧 成像仪今天坏了 验证不了了 2011-10-18 11:18:46
wanhscn(金币+1): 鼓励应助回帖 2011-10-18 18:36:45
我觉得可能是电泳液的问题，我曾经和你出现同样的问题，我买的电泳液PH不太对，所以出不来
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8楼2011-10-18 11:09:09
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三目

木虫 (小有名气)
marker的量加大试试看
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9楼2011-10-18 13:06:14
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阿娇

金虫 (正式写手)
TAE配错了？胶没溶好？
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10楼2011-10-18 18:26:43
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