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lixiaoling13

铜虫 (正式写手)

[求助] 哪位高手来帮我看看我这个失败的电泳图啊

提取的总DNA
做了好几次 就是不出marker。
电压25v 跑了1h ,第一个孔是marker
而且 其它条带也不亮啊
为什么啊为为什么?
胶的问题吗?还是缓冲液ph值的问题啊?肯定不是marker本身的问题 因为别人用这个marker就出。EB也没问题。
100v 20min也试过 不出
90v 20分钟 也不出
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生命,静静的流淌吧
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fisheart

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励应助回帖 2011-10-18 18:37:19
marker没问题,EB没问题的意思是? 和别人同用一管marker同一管EB? 用一样多量?先排除试剂本身问题,排除上样量过少的问题,再考虑其他
5楼2011-10-17 19:44:35
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shrimp5555

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lixiaoling13(金币+1): 答非所问啊 都说是总DNA了 还没有扩增呢 2011-10-17 16:44:38
1.1  反应循环数不够:一般都要在 35 个循环以上,可根据实验情况增加循环,但高于45个循环会增加过多的背景信号。
1.2  检测荧光信号的步骤有误:一般采用 72℃延伸时采集荧光,Taqman 方法则一般在退火结束或延伸结束采集信号。
1.3  引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性。
1.4  探针设计不佳:设计探针温度低于引物,造成探针未杂交上而产物已延伸。
1.5  模板量少:对未知浓度的样品应从系列稀释样品的最高浓度做起。
1.6  模板降解:避免样品制备中杂质的引入以及模板反复冻融的情况发生。
大大傻气加上少少耍流氓
2楼2011-10-17 16:17:18
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

MAKER都没出?是不是点样问题。点样时跑出去了还是?
还有就是染色时间问题。是不是时间短了.
3楼2011-10-17 17:32:12
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ybs007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你按分子克隆上把TAE 重新配一下吧,我以前见过玩命跑不出Marker的,换的TAE就好了。你可以试试。
平生我自知
4楼2011-10-17 17:49:52
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