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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 小分子蛋白电泳marker
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)

[求助] 小分子蛋白电泳marker

以前电泳marker的条带还好，有6条，但现在，后面的3条基本看不清楚了，应该不是电泳时间过长而跑出去了，模模糊糊可以看清，像是扩散了，请各路大神指点，附图，谢谢！
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1楼 2012-05-28 22:58:09
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回帖置顶 ( 共有1个 )

jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+5, 解答还是全面，学习啦~ 2012-05-30 10:34:13
zhaohq1209: 回帖置顶 2012-05-30 10:34:15
这个问题现象我以前好像见过的，可能有几个方面：
第一，你电泳时电压过高，我一般电泳时都是用很低的电压先跑个半小时，之后再加大到正常情况跑，放心不会扩散
第二，你胶没有制备好，或者没有充分凝和，这个不是很清楚是不是这个原因
第三，你染色时间稍微延长一点，最后洗脱再干净一点就差不多
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10楼2012-05-30 09:08:40
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
telomerase: 金币+3, 辛苦辛苦 2012-05-30 09:23:14
zhaohq1209: 金币+3, tricine是一种缓冲液吧，貌似在MOPS培养基中用过的 2012-05-30 10:33:47
引用回帖:
7楼: Originally posted by alert_pqs at 2012-05-29 22:27:40
1.7-40kDa，总共6条带，后面三条不知道怎么回事就弥散了，没用tricine-SDS-PAGE,直接用的Gly-SDS-PAGE,染色会有问题吗？我是用的考染，先固定30min，再60度10-15min，应该没问题吧，谢谢！...

那就是扩散了，Tricine-SDS-PAGE中的Tricine在电泳时具有浓缩样品的作用，让小分子样品在浓缩胶时用很好的浓缩效果，并且在分离胶时保持很窄的条带，用Gly代替Tricine就会出现10kDa以下的条带看不到或者很模糊的情况。
把电泳缓冲液换成Tricine试试吧
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alert_pqs
关注我关注的
9楼2012-05-30 00:45:34
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普通回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新上图，看不到你的图。
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2楼2012-05-29 12:33:55
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废哥117

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看不到你的图啊，根据你的描述，有可能是你的电泳时间过长，不过如果你不是做小分子蛋白，这个没什么大影响的，还有就是你的marker上样多少，是不是上的少了，所以感觉不清晰，不过应该不影响结果，你再做个内参不就行了
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不断提高自己
3楼2012-05-29 13:15:51
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
哦！！是跑的小分子蛋白，只不过只需要确定分子量大致范围就行，应该不是跑出去了，有图有真相，大家再帮忙看看，谢谢！
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4楼2012-05-29 20:35:06
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
能标下图上能看到的条带大小吗？你买来的Marker条带图有吗？最小条带是多少？10kDa or 5kDa or 3kDa or 1kDa？现在跑胶技术最小能显示1kDa的条带。

从你图上看可能分离胶太短，小分子条带扩散了，或者染色不对。
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关注我关注的
5楼2012-05-29 20:59:38
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
我想问下你用的什么胶跑的啊
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6楼2012-05-29 22:18:20
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-05-29 20:59:38
能标下图上能看到的条带大小吗？你买来的Marker条带图有吗？最小条带是多少？10kDa or 5kDa or 3kDa or 1kDa？现在跑胶技术最小能显示1kDa的条带。

从你图上看可能分离胶太短，小分子条带扩散了，或者染色不对。

1.7-40kDa，总共6条带，后面三条不知道怎么回事就弥散了，没用tricine-SDS-PAGE,直接用的Gly-SDS-PAGE,染色会有问题吗？我是用的考染，先固定30min，再60度10-15min，应该没问题吧，谢谢！
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7楼2012-05-29 22:27:40
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xzx018 at 2012-05-29 22:18:20
我想问下你用的什么胶跑的啊

Gly-SDS-PAGE   尿素胶
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8楼2012-05-29 22:28:40
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