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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我的胶出什么问题了，marker怎么少了三条带啊
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mtgfsina

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果断悉尼

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1楼 2012-03-14 11:25:14
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whb21

木虫 (著名写手)
★ ★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
1949stone: 金币+1, 我感觉mark还是比较稳定的 2012-03-15 09:59:28
marker可能出现降解现象，建议你增加maker的用量。你在上样前是否有将marker震荡混匀？
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2楼2012-03-14 12:06:05
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mtgfsina

禁虫 (小有名气)
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4楼2012-03-14 12:42:59
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果断悉尼

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★ ★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
送鲜花一朵
西瓜(金币+2): 谢谢斑斑捧场哦~我也怀疑是不是小条带跑出去了 2012-03-14 23:31:49
我觉得从两个方面分析吧
一就是你能否确认跑胶的时间没有过吧 不会是小的条带已经跑出去了
二就是你购买的marker要不是产品本身质量不好 要不就是变质了  大蛋白容易降解
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5楼2012-03-14 13:10:02
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mtgfsina

禁虫 (小有名气)
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6楼2012-03-14 13:26:07
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果断悉尼

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mtgfsina at 2012-03-14 13:26:07:
跑胶时间应该没过吧，溴酚蓝还在里面呢，
marker我买来就分装好放-20度保存了，每次拿出来才用，这可能就是产品问题

那应该是这样哦
因为其他条带都好好的
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7楼2012-03-14 13:26:58
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mtgfsina at 2012-03-14 12:42:59:
我混匀了啊，而且marker我已经加到20ul了，挺多的了，marker提示煮5min我煮了8min是否因为这降解啊

多煮三分钟不至于使marker降解的很严重，换个marker试试吧
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8楼2012-03-14 14:14:02
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wangdandan00

新虫 (初入文坛)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
只是Marker缺条带还是那个位置的所有蛋白条带都不显示，制胶的SDS有没有换过，如果SDS失效或纯度不好也会导致条带的缺失
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9楼2012-03-14 14:27:56
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晴天1882

木虫 (正式写手)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
你之前也是配得12%吗？你Marker中的大分子有多大？
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10楼2012-03-14 15:35:33
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mtgfsina

禁虫 (小有名气)
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11楼2012-03-14 22:38:02
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mtgfsina

禁虫 (小有名气)
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12楼2012-03-14 22:40:02
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mtgfsina

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13楼2012-03-14 22:41:41
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-03-15 14:21:04
我觉得还是缓冲液的问题吧，我们浓缩胶是1 M Tris-HCl, pH6.8，分离胶是1.5 M Tris-HCl, pH8.8.  这个pH很重要的，你不会两层胶都用的同一个pH吧
按照我个人的经验，胶浓度一般只影响小分子量的蛋白分离，浓度过低会导致小分子量的蛋白条带压在一块，但是大分子量蛋白在8%-15%的胶上都能良好分离。
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17楼2012-03-15 07:33:43
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guxinhan123

银虫 (正式写手)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
换个marker试试
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18楼2012-03-15 13:38:37
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冰泉cathy

木虫 (小有名气)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
我们实验室最近也出了这样的问题，好几个人跑胶都出现了这样的状况，marker中有好几条带很模糊，有的甚至看不见，如果不说明一下的话，估计根本分不清楚marker和样品，我们统一认为，这应该是产品的问题，根本不是操作或者buffer的问题。
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19楼2012-03-15 14:22:33
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若水5886

新虫 (小有名气)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
1 你说有的条带没有跑出来，那是大分子量的还是小分子量的没有跑出来？如果是小分子量的可以考虑跑出去了，要是大分子量的话可以考虑是不是降解了，你看有没有杂带出现就知道了。
2 marker买回来立刻分装使用是很好的习惯，如果觉得是marker本身有问题，那么你可以借别人的用点看看效果
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20楼2012-03-15 14:40:42
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wangdandan00

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by mtgfsina at 2012-03-14 22:40:02:
sds换过，我配的10%sds溶液放置一段时间总是出现沉淀，我都是摇匀了继续用，没问题吧

SDS换过厂家吗，有的卖的纯度不好容易失效，另外最好保存在20度左右，不要让它沉淀， 沉淀后浓度会发生变化，高温液可能会使它失效，最好也不要一次配置太多。
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21楼2012-03-15 14:55:10
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mtgfsina

禁虫 (小有名气)
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22楼2012-03-15 15:17:57
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mtgfsina

禁虫 (小有名气)
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23楼2012-03-15 15:21:48
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wangdandan00

新虫 (初入文坛)
不会失效，但是要电泳级的SDS才可以。
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24楼2012-03-15 16:40:23
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linatracy

金虫 (小有名气)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
我觉得是你胶的问题，我看其他的泳道也不是很清楚呀！如果是Mark的问题，那其他的带都不清楚怎么解释！
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25楼2012-03-15 22:17:52
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by mtgfsina at 2012-03-14 22:41:41:
marker我让别的实验室的跑了一下没有问题，那是什么原因呢？？？呜呜呜

只能是你胶的问题，最好是按照那个实验室的配方配吧
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26楼2012-03-16 07:36:39
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jiafeimao21

银虫 (正式写手)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
能借个marker来排除法试一试？冰箱不靠谱的
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27楼2012-03-16 09:09:29
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mtgfsina

禁虫 (小有名气)
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28楼2012-03-16 14:27:30
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生物流风

木虫 (小有名气)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
来看下
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29楼2012-03-16 15:22:47
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可帅儿

银虫 (正式写手)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
加油LZ~！！
我现在在学习中呢，还不会做电泳~~公司刚建的，实验室啥仪器都没有，做不起来T T
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30楼2012-03-16 16:57:59
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holygoof

新虫 (小有名气)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
Privatversicherte machen keine Angaben zur Krankenversicherung
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31楼2012-03-16 17:25:15
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by mtgfsina at 2012-03-16 14:27:30:
用水封分离胶会不会把分离胶稀释了啊，我看我的条带都在下面，上面无条带，可是用无水乙醇封胶那乙醇不是会吸水的吗，那胶里面的水会不会少啊

水或异丙醇都用过，没有发生过问题
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32楼2012-03-17 09:22:22
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
我认为是电泳缓冲液和胶pH的问题呀，如果pH不对的话会十分影响结果。
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33楼2012-04-06 09:49:57
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yanfeier

金虫 (小有名气)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
应该是蛋白降解了，我们分装一般保存在-20以及-80，用之前沸水煮，之后放于-20，防止时间过长。而且这marker应该是出现六条带吧，如果是那样的话你之前跑出条带来了，但是效果也不好，建议换一下新的缓冲液试试。
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34楼2012-04-06 15:27:27
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
★
mtgfsina(金币+1): 谢谢参与
我最近也这样啊！烦死了，，做了好几次，，我的好像是电泳条带扩散了，上面的好好的，下面的3条很不清楚，开始跑的一次勉强还可以，附图，就教！！谢谢！
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35楼2012-05-28 23:05:03
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zypei

铁虫 (小有名气)
电泳条件和时间是多少
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36楼2012-08-28 10:39:17
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简单回复
yaya2133楼
2012-03-14 12:25  
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lihuan052514楼
2012-03-14 22:42  
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haixing200815楼
2012-03-14 23:12  
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祝福祝福
chs56485148216楼
2012-03-14 23:37  
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