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alert_pqs

新虫 (初入文坛)

[求助] 小分子蛋白电泳marker

以前电泳marker的条带还好,有6条,但现在,后面的3条基本看不清楚了,应该不是电泳时间过长而跑出去了,模模糊糊可以看清,像是扩散了,请各路大神指点,附图,谢谢!
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
telomerase: 金币+3, 辛苦辛苦 2012-05-30 09:23:14
zhaohq1209: 金币+3, tricine是一种缓冲液吧,貌似在MOPS培养基中用过的 2012-05-30 10:33:47
引用回帖:
7楼: Originally posted by alert_pqs at 2012-05-29 22:27:40
1.7-40kDa,总共6条带,后面三条不知道怎么回事就弥散了,没用tricine-SDS-PAGE,直接用的Gly-SDS-PAGE,染色会有问题吗?我是用的考染,先固定30min,再60度10-15min,应该没问题吧,谢谢!...

那就是扩散了,Tricine-SDS-PAGE中的Tricine在电泳时具有浓缩样品的作用,让小分子样品在浓缩胶时用很好的浓缩效果,并且在分离胶时保持很窄的条带,用Gly代替Tricine就会出现10kDa以下的条带看不到或者很模糊的情况。
把电泳缓冲液换成Tricine试试吧

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9楼2012-05-30 00:45:34
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查看全部 16 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
重新上图,看不到你的图。
2楼2012-05-29 12:33:55
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废哥117

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看不到你的图啊,根据你的描述,有可能是你的电泳时间过长,不过如果你不是做小分子蛋白,这个没什么大影响的,还有就是你的marker上样多少,是不是上的少了,所以感觉不清晰,不过应该不影响结果,你再做个内参不就行了
不断提高自己
3楼2012-05-29 13:15:51
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)

哦!!是跑的小分子蛋白,只不过只需要确定分子量大致范围就行,应该不是跑出去了,有图有真相,大家再帮忙看看,谢谢!


4楼2012-05-29 20:35:06
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