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zzjj_207

金虫 (小有名气)

[求助] RNA 提取 OD 260/230 值偏低

最近在用Bioline的试剂盒提取植物幼苗(包括根)的RNA。 提取的RNA的条带还可以(见附图),OD260/280都大于2.0, 但是OD260/230却小于1.8,有的甚至0.5~0.6,点样空附近可以看到一条模糊的带,是不是糖和盐类物质?怎么采取补救措施去除?求高手指点?
RNA 提取 OD 260/230 值偏低
图片4.jpg
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zzjj_207

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-11 11:30:45
我觉得你提的RNA不错了,比较完整。A260/230比较低可能是试剂中一些成分的污染,A260/280可以说明蛋白污染不多。你点样孔的暗带是蛋白核酸复合体。不知道你的RNA要做什么用,一般这样的样品可以直接用的,不用特别纠 ...

谢谢回复,我后边要做测序,要求A260/230大于1.8,我是用的Bioline的Kit 提取的,可不可以按照步骤提完以后,最后再用70%的酒精再洗一次呢?不知道能不能去除那些杂质?
3楼2013-07-11 12:29:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 很详细 2013-07-11 12:18:49
zzjj_207: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-15 09:42:24
我觉得你提的RNA不错了,比较完整。A260/230比较低可能是试剂中一些成分的污染,A260/280可以说明蛋白污染不多。你点样孔的暗带是蛋白核酸复合体。不知道你的RNA要做什么用,一般这样的样品可以直接用的,不用特别纠结A260/230。
2楼2013-07-11 11:30:45
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
kx444555: 金币+2, 热心的版主 2013-07-11 14:44:11
amisking: 回帖置顶 2013-07-11 18:25:25
我也遇到过这种情况。260/230偏低可能是提取试剂的残留,或者乙醇没挥发干净,我碰到的是后者。当时解决的方法也就是尽量去除乙醇了。异丙醇沉淀RNA之后,加75%乙醇洗,洗完用蓝枪头把乙醇吸走,再短暂离心,用白枪头将残余的乙醇尽量吸干,然后等乙醇充分挥发后再加水溶解RNA。挥发乙醇时注意观察RNA沉淀块,沉淀块由白色变成半透明时乙醇就挥发得差不多了,此时加水比较合适。据说挥发时间太长,RNA水分很少时再溶解会很困难,不过我没遇见过。
4楼2013-07-11 12:39:05
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zzjj_207

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-07-11 12:39:05
我也遇到过这种情况。260/230偏低可能是提取试剂的残留,或者乙醇没挥发干净,我碰到的是后者。当时解决的方法也就是尽量去除乙醇了。异丙醇沉淀RNA之后,加75%乙醇洗,洗完用蓝枪头把乙醇吸走,再短暂离心,用白枪 ...

谢谢版主,我用柱式的Kit 提的,按照试验步骤用试剂盒里的wash buffer 洗了三次,每次加了wash buffer都会短暂离心。最后RNA留在柱子的膜上,加水溶解。会不会是那个wash buffer 里的残留? 我在想可不可以在加水溶解前再用乙醇洗一次,不知道会不会好些?新手上路,请多指教!
5楼2013-07-11 13:24:17
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