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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RNA质量检测OD值的意义？
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bianyu

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA质量检测OD值的意义？ 已有3人参与

在分光光度计测定RNA吸光度值时，有A230，A260，A280
请问A230代表什么？会出现负值吗？是什么原因？
A260/230代表什么？
RNA纯度仅看吸光度比值么？我查资料有说A260需在0.15~1之间才可信！

谢谢大家！
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莎姑子

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1楼 2011-02-21 22:09:35
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cxt86

金虫 (小有名气)
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scelab(金币+5): 谢谢热心虫友 2011-02-22 08:47:36

如果没记错的话  230是盐离子浓度  260是核酸含量  280是蛋白还有残留的有机试剂等的含量
230应该不会有负值吧，就算提取失败也没见过负值，可能是做的太少。。。
260/230主要是看RNA中是否还有残留的盐离子，盐离子可以用乙醇洗去
我们一般结合RNA的跑胶结果和吸光度两方面判断RNA纯度，260在0.15~1之间可信的原因是  分光光度计在0.15~1之间的数据是可信的，超过1之后分光光度计准确度降低，高于1时，可以稀释后再测
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2楼2011-02-21 23:12:02
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bianyu

铜虫 (正式写手)

那么A260/230的比值在什么范围才能说明样品的盐离子浓度是在许可范围内呢？不影响下面的实验？
有没有提取过肝组织RNA的同学？我提取的降解很严重，肝组织内RNase含量较高，有没有特别需要注意的地方？向你们请教些经验！！！
谢谢！
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3楼2011-02-22 08:46:09
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bianyu

铜虫 (正式写手)

还有就是就是RNA沉淀的问题，资料有用无水乙醇、70%乙醇、异丙醇沉淀，这几种方法有什么不同？
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4楼2011-02-22 10:02:39
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cxt86

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+5): good 2011-02-23 09:47:25
引用回帖:
Originally posted by bianyu at 2011-02-22 02:02:39:
还有就是就是RNA沉淀的问题，资料有用无水乙醇、70%乙醇、异丙醇沉淀，这几种方法有什么不同？

260/230在2以上说明盐离子基本无残留。。。用乙醇两遍基本都在2以上了
RNA沉淀方面，用无水乙醇比较经济，但是沉淀比较慢，我们一般是放在-80℃半小时或者-20℃2小时，异丙醇是强沉淀剂，比较贵，但是沉淀只需在常温下10~15分钟就行，70%乙醇没试过，只用70%乙醇洗盐离子，70%乙醇和无水乙醇洗盐离子的效果差不多
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5楼2011-02-22 13:48:48
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bianyu

铜虫 (正式写手)
谢谢cxt86 的详细解答！学习了！
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6楼2011-02-23 09:37:14
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莎姑子
送鲜花一朵
7楼2012-03-28 16:09:05
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