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bianyu

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RNA质量检测OD值的意义? 已有3人参与

在分光光度计测定RNA吸光度值时,有A230,A260,A280
请问A230代表什么?会出现负值吗?是什么原因?
A260/230代表什么?
RNA纯度仅看吸光度比值么?我查资料有说A260需在0.15~1之间才可信!

谢谢大家!
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bianyu

铜虫 (正式写手)


还有就是就是RNA沉淀的问题,资料有用无水乙醇、70%乙醇、异丙醇沉淀,这几种方法有什么不同?
4楼2011-02-22 10:02:39
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cxt86

金虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+5): 谢谢热心虫友 2011-02-22 08:47:36

如果没记错的话  230是盐离子浓度  260是核酸含量  280是蛋白还有残留的有机试剂等的含量
230应该不会有负值吧,就算提取失败也没见过负值,可能是做的太少。。。
260/230主要是看RNA中是否还有残留的盐离子,盐离子可以用乙醇洗去
我们一般结合RNA的跑胶结果和吸光度两方面判断RNA纯度,260在0.15~1之间可信的原因是  分光光度计在0.15~1之间的数据是可信的,超过1之后分光光度计准确度降低,高于1时,可以稀释后再测
2楼2011-02-21 23:12:02
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bianyu

铜虫 (正式写手)


那么A260/230的比值在什么范围才能说明样品的盐离子浓度是在许可范围内呢?不影响下面的实验?
有没有提取过肝组织RNA的同学?我提取的降解很严重,肝组织内RNase含量较高,有没有特别需要注意的地方?向你们请教些经验!!!
谢谢!
3楼2011-02-22 08:46:09
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cxt86

金虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-02-23 09:47:25
引用回帖:
Originally posted by bianyu at 2011-02-22 02:02:39:
还有就是就是RNA沉淀的问题,资料有用无水乙醇、70%乙醇、异丙醇沉淀,这几种方法有什么不同?

260/230在2以上说明盐离子基本无残留。。。用乙醇两遍基本都在2以上了
RNA沉淀方面,用无水乙醇比较经济,但是沉淀比较慢,我们一般是放在-80℃半小时或者-20℃2小时,异丙醇是强沉淀剂,比较贵,但是沉淀只需在常温下10~15分钟就行,70%乙醇没试过,只用70%乙醇洗盐离子,70%乙醇和无水乙醇洗盐离子的效果差不多
5楼2011-02-22 13:48:48
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